蜂胶对幽门螺杆菌的体外抑制作用

摘 要：目的：探讨蜂胶对幽门螺杆菌(H.pylori) 的体外抑制作用，为进行体内试验提供依据。方法：95%乙醇溶解蜂胶并做连续2倍倍比稀释至1:1024。采用琼脂平板扩散法检测对幽门螺杆菌的抑菌效果。结果:抑菌圈直径随蜂胶浓度降低逐渐变小，1:2时抑菌环直径达(32.15+0.91)mm；1:1024 时抑菌环直径为(15.65±1.21)mm。结论：黑龙江蜂胶对幽门螺杆菌具有明显的体外抑制作用，抑菌活性与浓度呈正相关。

关键词：幽门螺杆菌；蜂胶；抑菌作用

作者：陆少燕，宗素进，杜苗苗，林 刚，杜季梅* (温州医学院检验医学院，浙江温州325027)

门螺杆菌(Heli cob actor pylori，Hp) 是人类常见的致病菌，是慢性胃炎、消化性溃疡等多种消化道疾病的重要致病因素之一，与胃癌的发生密切相关，1994年国际癌症组织将其确定为Ⅰ类致癌原。

蜂胶(propolis) 是蜜蜂从植物幼芽与树十上采集的树胶与其上颚腺分泌物和蜂蜡等混合加工而成的一种具有芳香 气味的胶状固体物。蜂胶成分复杂，已知成分包括多酚类 (黄酮、酚酸及其酯类)、萜类、甾类、氨基酸及挥发性物质，不仅在抗肿瘤、抗氧化、抗炎症和免疫调节等方面具有重要的生物活性。中医药文献记载，蜂胶具有润肤生肌、解毒杀菌、祛风止痛之功效，在民间有服用蜂胶酒治疗胃病的习惯。国内外研究证明，蜂胶不仅对多种细荣、真菌、病毒等有抑制和杀灭作用，还具有抗氧化、增强巨噬细胞吞、促进肿瘤细胞凋亡等作用。

根据前期试验结果，作者选择黑龙江纯蜂胶，用95%乙醇溶解后，对IIp进行体外抑荣实验， 结果报道如下。

1、材料

1.1 原料与试剂

菌株：NCTC 11637，由浙江大学严杰教授馈赠；培养基：哥伦比业培养基(CMO 331)，10%脱纤维绵羊血(购自杭州 新锐生物工程有限公司)；纯蜂胶：购于黑龙江省牡丹江市小蜜蜂生物工程有限责任公司；溶剂：乙醇，分析纯；其他：无菌蒸馏水、6号新华滤纸、游标卡尺等。

1.2 仪器与设备

手提式不锈钢蒸汽火菌器，艾奇小厌氧罐，电热恒温培 养箱，双人单面净化工作台。

2 方法

2.1 蜂胶纸片制备 称取纯蜂胶100g，磨碎后溶于200mL95%乙醇中(稀释 度为1:2)，连续2倍倍比稀释至1:1024，得到不同浓度的蜂胶溶液。用打孔器将6号新华滤纸打成直径为6mm的圆形纸片， 121℃高压蒸汽灭菌15~20min，烘干备用。每张滤纸片加不同浓度蜂胶溶液7pL，以95%乙醇作空白对照。37℃放置lh，制成含量不同的药敏纸片，4℃避光保存备用。

2.2 H.pylori固体培养基的配制

称取哥伦比亚琼脂干粉19.5g，加人蒸馏水450mL，用 121℃高压蒸汽灭菌15~20min， 待冷却到50℃， 加50mL脱纤维绵羊血，配成含10%纤维绵羊血的哥伦比亚培养基，倾倒于无菌培养皿。

2.3 菌液的制备

将H.pylori于厌氧罐中在37℃孵箱内培养3天， 用布氏肉汤将其洗脱配制成悬液，通过酶标仪检测幽门螺杆菌浓度，将其制备为108CFU/mL的布氏肉汤菌液。

2.4 抑菌试验将108CFU/mL的布氏肉汤菌液接种到哥伦比亚血平板后，用镊子小心将不同浓度药敏纸片贴于平板上。每个平板贴三片，呈正三角形，每个浓度纸片共重复4次。置厌氧培养罐中，37℃培养72h，游标卡尺测量抑菌圈直径，记录测量结果。

3 结果

不同浓度蜂胶纸片对幽门螺杆菌(H.pylori) 的72h抑菌作用结果见表1.

4 讨论

蜂胶含有黄酮类、酚类、内酯、醛、酮、甾类等化合物，同时为无毒、无刺激、无致癌性，并具有抗菌、抗病毒、免疫激、镇痛、促进组织再生等作用，因此蜂胶享有“紫色黄金”美誉。咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester，CAPE) 是蜂胶中的主要活性成分，它作为抗氧化药物和癌预防药物研究的明星分子，受到了人们极大关注。CAPE对胃的保护通过阻止幽门螺杆菌及其诱发的细胞因子KappaB蛋白降解，而且CAPE能够抑制由幽门螺杆菌诱发的细胞增殖以及细胞因子TNF-alpha及IL-8的生成，另外CAPE还可以阻断幽门螺杆菌诱发的COX-2的表达。经CAPE预处理的胃上皮细胞同样能够阻断细胞因子和细胞分裂素诱发的NF-kappaB和AP-1的表达。

目前为止，关于蜂胶的临床研究报道不多，Boy a no uaL 等认为保加利亚蜂胶有很强的剂量依赖的抑菌活性的。Boy an ovaL等认为利用干燥的蜂胶纸片得到的保加利亚蜂胶具有重要的抗幽门螺杆菌的活性，也能够抑制大肠弯曲菌以及空场弯曲菌的生长，蜂胶在幽门螺杆菌感染的预防与治疗方面具有巨大的潜力。

本试验结果表明，95%乙醇溶解的黑龙江纯蜂胶在不同浓度下对幽门螺杆具有较好的抑制作用，抑菌作用随浓度降低而变小，从含量看明显较陈炼等报导的江西蜂胶效果好。与常用抗菌药物相比，含6.80pg/片的蜂胶纸片抑菌圈直径可达15.65mm，这与克拉霉素(15pg/片，>17mm 敏感，14~17mm中度敏感，<14mm耐药)，呋喃唑酮 (300pg/片，>16mm敏感，15~16mm中度敏感，<15mm 耐药)，以及羟氨苄青霉素(40pg/片>16mm敏感，14~ 16mm中度敏感，<14mm耐药)相当。鉴于蜂胶不仅具有抗幽门螺杆菌的作用，还具有促进组织愈合和抑制细胞增殖等作用，在抗生素类药物的耐药性问题日益突出的情况下，蜂胶作为一个多效的天然药物，在幽门螺杆菌感染相关疾病治疗方面可能具有广阔的应用前景。

参考文献：（略）