蜂胶保健食品中总黄酮测定方法研究

食品中总黄酮的检测方法有多种,一种是高效液相色谱法[1]。此法不能检测总黄酮,还能测定其中各种不同黄酮含量,但因受仪器和标准物质等条件的限制而难以推广。二是直接比色法。根据其颜色深浅,计算总黄酮含量,此法简单粗糙、干扰因素较多,结果不可信。三是利用黄酮类化合物与三价铝离子反应,生成黄色结合物,在一定浓度范围内符合朗伯比尔定律,方法简单,结果可靠,类似检测方法曾有过报道[2]。本文采用更为安全、可靠的三氯化铝吸光度法,检测蜂胶保健食品中的总黄酮,获得了满意的结果。

1 材料和方法

1.1 仪器与设备

日本岛津UV-2540紫外可见光分光光度计;德国赛多利斯电子分析天平(1/万)。

1.2 样品

蜂胶口服液;蜂胶浓缩液;蜂胶片;蜂胶胶囊;蜂胶软胶囊。

1.3 试剂

1.3.1 无水乙醇:分析纯。

1.3.2 芦丁标准物质:购自中国药品生物制品检定所。精密称取减压干燥至恒重的芦丁标准品0.5000g,置于100ml容量瓶中,加适量的无水乙醇使其充分溶解,加无水乙醇至刻度,摇匀,配制成芦丁标准储备液,置冰箱保存。检测前配制成0.20g/L的芦丁标准使用液。

1.3.3 氯化铝:分析醇AlC1₃.H₂O,配制成100g/L溶液使用。

1.3.4.实验方法

1.41样品处理:块状或丸状固体样品:随机抽取具代表性待检样品约20g,碾碎磨成粉状混匀,准确称取0.5g左右,均匀样品于小烧杯中,加20ml无水乙醇,不断搅拌,使其充分溶解,静置2min,上清液小心过滤于100ml容量瓶中,残渣再加20ml无水乙醇同样处理,如此反复多次,直至残渣液无色,同时注意淋洗纸至无色,混匀后定容至刻度待检。

胶囊状样品:随机抽取待检样品2~3粒于小烧杯中,加20ml无水乙醇，用剪刀将其剪碎(剪刀上残留物用无水乙醇洗下),随后处理同上。

<">黏稠液体样品:准确称取均匀代表性样品0.5g左右,于100ml容量瓶中,混匀定容至刻度待检。

液体样品:直接准确吸取均匀代表性样品3~10ml于100ml容量瓶中,加适量无水乙醇,混匀后定容至刻度待检。检测时,以上待检样品溶液,若浓度过度,可再作适当稀释;若浓度太低,可加大取样量。

1.4.2 标准曲线制备:准确吸取0.20g/L的芦丁标准液0.10、0.50、1.00、1.50、2.00、3.00ml,分别置于25ml比色管内,加无水乙醇至10ml,各管中分别加入100g/L氯化铝溶液0.5ml,混匀后定容至刻度(25ml)静置15min后,在415nm波长处,以无水乙醇调节零点,测定各管吸光度(A)值,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.4.3 样品测定:准确吸取上述待检样品1.00ml,加无水乙醇至10ml,加100g/L氯化铝溶液0.5ml,混匀后定容至刻度。同时做样品空白试验(不加氯化铝显色液,其他操作相同),静置20min后,在415nm波长处以无水乙醇调节零点,先测样品空白A值,再测样品A值,减去空白吸光度后,通过线性回归方程计算其总黄酮含量。

2 结果和讨论

2.1 显色时间稳定性试验试验表明,加显色剂氯化铝后,20min后至4h,室温下溶液的吸光度无显著性变化。4h后开始明显降低。

2.2 线性范围

试验表明,黄酮的铝离子黄色络合物,在波长415nm左右有最大吸收峰,黄酮含量在一定浓度范围内,符合郎伯-比尔定律,其线性回归方程Y=0.9123X - 0.0086,相关系数r=0.9998。

2?3?精密度与准确度试验

将5种样品待检溶液分别平行测定6次,分别计算其相对标准偏差(RSD)最大为1?96%,最小为0.047%。取其中一种样品待检溶液,分高、中、低三种浓度,分别加入芦丁标准溶液,测得其回收率分别是:104.9%、98.2%和95.7%。

本研究表明:采用的三氯化铝吸光度法测定保健食品蜂胶中的黄酮,是一种简便、快速的方法,具有较高的精密度和准确度。黄酮的提取选用无水乙醇,不用甲醇,避免了甲醇对人体的毒害作用。显色反应在中性环境中即可,并不特别需要碱性环境,这样避免因加醋酸钾和氢氧化钠产尘浑浊和沉淀而影响比色。

参考文献

[1] NY/T629-2002.中华人民共和国农业行业标准.

[2] 刘飞,谢镇远.吸光光度法测定荞麦花叶中总黄酮.理化检验化学分册,2005,41:93-94,97.