蜂胶的外用抗炎作用实验研究

【摘要】目的:观察蜂胶的外用抗炎作用。方法:昆明种小鼠60只,随机分为模型对照组(3.0 g·kg^-1吐温80)、阳性药布洛芬乳膏组(4.0 g·kg^-1),蜂胶高、中、低剂量组(0.72,0.24,0.08 g·kg^-1),每组12只采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型,检测小鼠血清中前列腺素E₂(PGE₂),一氧化氮(NO)含量,观察蜂胶对二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型的影响;Wistar大鼠60只,分组同上,模型对照组(3.0 g·kg^-1吐温80),布洛芬乳膏组(3.0 g.kg^-1),蜂胶高、中、低剂量组(0.20,0.10,0.05 g·kg^-1),采用角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型,检测大鼠炎症组织中PGE2含量,观察蜂胶对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀炎症模型的影响。结果:蜂胶能明显抑制二甲苯导致的小鼠耳肿胀(P<0.05);能明显减轻角叉菜胶导致的大鼠足肿胀(P<0.05);能显著降低小鼠血清中PGE₂,NO含量(P<0.01);能显著降低大鼠炎症组织中PGE₂含量(P<0.01)。结论:蜂胶外用具有明显的抗炎作用。

【作者】 王雪妮  杜娟  黄云英  王元元  沈丽  张德芹

【关键词】蜂胶 抗炎 前列腺素E₂ 一氧化氮

蜂胶为蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物。多于夏季从蜂箱中收集,除去杂质即得。蜂胶味苦、辛,性寒;归脾、胃经。是一味既可内服,又可外用的常用中药。2005年版《中国药典》首次收载了蜂胶功能主治:抗菌消炎、调节免疫、抗氧化、加速组织愈合。用于高脂血症和糖尿病的辅助治疗^[1]。杨锋等^[2]通过观察灌胃醇溶水提法制备的蜂胶水溶液对小鼠毛细血管通透性及二甲苯致耳肿胀的影响,发现采用醇溶水提法制得的蜂胶水溶液具有明显的抗炎作用。胡福良等^[3]通过灌胃蜂胶醇提液和水提液对小鼠毛细血管通透性、大鼠急性关节炎、大鼠急性胸膜炎的影响探讨蜂胶对急性炎症的影响,实验结果表明蜂胶水提液和醇提液对急性炎症有明显的抑制作用。上述文献以及以往对蜂胶抗炎作用的研究,多是通过灌胃给药,本实验通过应用两种炎症模型对蜂胶外用抗炎作用进行了研究,并对其作用机制进行了初步的探讨,从而为《中国药典》修订及规范蜂胶外用功能主治提供文献依据。

1 材料

1.1 药物

蜂胶药材购于安徽新兴中药材饮片有限公司,批号20100127。由天津中医药大学生药教研室李天祥副教授鉴定为蜜蜂科昆虫意大利蜂Apismellifera L.的干燥分泌物。由于蜂胶很难溶于水,所以研究多采用蜂胶乳化剂进行实验研究。本实验给药前用吐温80(聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯)将蜂胶配制成7g生药/100g的药液。布洛芬乳膏,天津中美史克制药有限公司,批号09080679。

1.2 动物

SPF级Wistar大鼠,雄性,体重(160±10)g,由天津市山川红实验动物科技有限公司提供,许可证号SCXK(津)2009-0001;SPF级昆明种小鼠,雄性,体重(24±2)g,由天津市山川红实验动物科技有限公司提供,许可证号SCXK(津)2009-0001;实验室温度(24±2)℃;相对湿度(50±10)%。

1.3 试剂

二甲苯,天津市北方天医化学试剂厂,批号20100204;角叉菜胶,美国Sigma公司,批号069k0023;吐温80,天津市北方天医化学试剂厂,批号20080902;小鼠前列腺素E₂(PGE₂)酶联免疫试剂盒试剂盒美国R&D公司,天津博奥信德科技有限公司提供,分装批号20100410;小鼠(NO)酶联免疫试剂盒,美国R&D公司,天津博奥信德科技有限公司提供,分装批号20100410;大鼠PGE₂酶联免疫试剂盒,美国R&D公司,天津博奥信德科技有限公司提供,分装批号20100415。

1.4 仪器

JA-5003N-精密电子天平(上海精密科学仪器有限公司);YLS-Q4-耳肿打耳器(济南益延科技发展有限公司);YLS-7B-大鼠足跖容积测定仪(济南益延科技发展有限公司)。

2 方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验^[4-5]

昆明种小鼠60只,按体重随机区组分为模型对照组、阳性药布洛芬乳膏组、蜂胶高、中、低剂量。给药前快速除去各组小鼠背毛(面积约为4.0cm²),各组均于背部脱毛处涂抹相应药物。模型对照组涂抹与蜂胶中剂量等量的吐温80 3.0 g·kg-1·d-1;布洛芬乳膏组每日用药剂量为4.0g·kg^-1;蜂胶高、中、低剂量组每日用药剂量分别为生药0.72,0.24,0.08 g·kg^-1。每日涂药1次,连续7d。给药治疗期间各组小鼠每日均饲以普通饲料,自由进食饮水。末次给药1h后,在小鼠右耳正反两面用微量加样器各滴加10μL二甲苯致炎。左耳不做任何处理作为对照。致炎30min后摘小鼠眼球取血,注入试管中静置2h,1000 r·min^-1离心20min,分离血清,用小鼠PGE₂,NO酶联免疫试剂盒检测PGE₂,NO等指标。摘眼球取血后用颈椎脱臼法处死小鼠,沿耳廓基线剪下双耳,用直径8 mm的耳肿打耳器打下双耳片,立即用精密电子天平称重。左右耳片质量之差即为肿胀度。

2.2 角叉菜胶致大鼠足跖肿^[6-8]

Wistar大鼠60只,按体重随机组分为模型对照组、阳性药布洛芬乳膏组、蜂胶高、中、低剂量。给药前一日除去各组大鼠背毛(面积约16.0cm²),各组均于背部脱毛处涂抹相应药物。模型对照组涂抹与蜂胶中剂量等量的吐温80 1.33 g·kg^-1·d^-1;布洛芬乳膏组每日用药剂量为3.00g·kg^-1;蜂胶高、中、低剂量组每日用药剂量分别为生药0.20,0.10,0.05g·kg^-1。每日涂药1次,连续7d。给药治疗期间各组大鼠每日均饲以普通饲料,自由进食饮水。给药第7天,致炎前用足趾容积测量仪测定大鼠右后足体积。末次给药1h后,分别于大鼠右后足趾腱膜皮下注射1%角叉菜胶500μL·kg^-1致炎。测定致炎后1,2,4,6h的右后足体积,致炎前与致炎后足跖体积之差即为肿胀度。角叉菜胶大鼠足跖致炎6h后,处死大鼠,于踝关节上长毛与绒毛明显分界处剪下肿胀足爪,称重,放入4℃的冷生理盐水中备用。用咬骨钳将右后足咬碎后放入预先准备的5mL0.9%的氯化钠注射液中浸泡2h,3500r·min^-1离心15min,取上清,用大鼠PGE₂酶联免疫试剂盒测炎症组织中PGE₂含量。

2.3 统计学方法

采用SPSS11.5软件进行处理。计量资料以x珋±s表示,大鼠足跖肿胀数据采用重复测量方差分析进行组间比较,其他指标采用单因素方差分析,P<0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

与模型对照组比较,蜂胶高、中、低剂量组肿胀度明显降低,有显著性差异(P<0.05)。见表1。

3.2 对致大鼠足跖肿的影响

与模型对照组比较,阳性药布洛芬乳膏组和蜂胶中、低剂量组肿胀度明显降低,有显著性差异(P<0.05)。见表2。

3.3对耳廓肿胀小鼠血清中PGE₂,NO含量的影响

与模型对照组比较,阳性药布洛芬乳膏组和蜂胶高、中、低剂量组PGE₂,NO含量明显降低,有显著性差异(P<0.01)。见表3。

3.4 对足跖肿胀大鼠炎症组织中PGE₂含量的影响

与模型对照组比较,蜂胶高、中、低剂量组PGE₂含量明显降低,有显著性差异(P<0.01)。见表4。

4 讨论

布洛芬为非选择性COX抑制剂,有明显的抗炎、解热、镇痛作用。其机制主要是通过抑制环氧酶,抑制PGs的产生,临床主要用于风湿性关节炎、骨关节炎、强直性关节炎、急性肌腱炎、滑囊炎等^[9]。本实验过程中布洛芬乳膏没有明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,也没有明显减轻角叉菜胶导致的大鼠足跖肿胀,原因可能在于布

洛芬乳膏对本实验中的两种急性炎症水肿模型不敏感,更适合用于治疗风湿性关节炎、骨关节炎等炎症类型。本实验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀两种炎症模型观察蜂胶的抗炎作用。高、中剂量的蜂胶对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用,而中、低剂量的蜂胶对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制效果较好,原因可能是不同炎症模型或是不同种属动物蜂胶的治疗量不一样。总体实验结果表明,蜂胶有明显的抗炎作用,能够有效抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,显著减轻角叉菜胶致大鼠足跖肿胀。并能显著降低小鼠血清中的PGE₂,NO含量和大鼠炎症组织中PGE₂含量。PGE₂可加强白细胞的趋化作用,增加血管通透性,增加溶酶体酶的释放,促进炎症反应^[10]。NO促进炎症反应的作用包括使血管舒张,形成水肿,增加炎性渗出,促进败血症的发展,激活前列腺素合成酶及参与类风湿的发展等^[11-12]。炎症组织中PGE₂,NO的含量,不仅是反映药物抗炎作用的一个指标,而且可以揭示药物的抗炎机制。本实验发现蜂胶能够降低小鼠血清中的PGE₂,NO含量,降低大鼠炎症组织中的PGE₂含量,提示抑制血管中的PGE₂,NO和炎症部位PGE₂的合成或释放可能是其发挥抗炎作用的重要途径。

综上所述,蜂胶外用具有明显的抗炎作用。随着国内外对蜂胶的研究不断深入,蜂胶作为外用药,其外用价值也将会越来越受到人们的重视。目前蜂胶作为外用解毒消肿,收敛生肌良药已广泛应用于临床各科疾病。深入挖掘文献有关蜂胶外用功能主治的记载,开展蜂胶外用药理及作用机制研究,不仅可为《中国药典》修订蜂胶外用功能主治标准提供详实的文献依据,同时可为开展蜂胶中医外治研究提供参考,蜂胶的外用具有重要的开发价值和应用前景。对其作用机制的探讨,有待于进一步的深入研究。

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