蜂胶软胶囊对糖尿病小鼠细胞免疫水平的影响

[概要]目的：探讨蜂胶软胶囊对小鼠免疫功能的影响。方法：分别以175、350、700mg/kgBW剂量的总黄酮灌胃后检测各项免疫指标。结果：蜂胶黄酮能刺激小鼠脾淋巴细胞的增值、转化，也能促进小鼠迟发型变态反应，且作用随着剂量的增加而增强。结论：蜂胶软胶囊能提高小鼠的细胞免疫功能。

[关键词]： 蜂胶黄酮 细胞免疫 小鼠

[作者]：朱 旭  魏高文  陈书  唐源苑

糖尿病（Diabetes mellitus，DM）是因胰岛素绝对或者相对不足而引起的体内糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的一种疾病，目前尚无有效的治疗措施。随着生活方式的改变和老龄化进程的加速，我国DM的患病率正在呈快速上升趋势，成为继心脑血管疾病、恶性肿瘤之后的另一种严重危害人民健康的慢性非传染性疾病。^[1]2007年全国成年人糖尿病调查显示，糖尿病患病率为9.7%，估计我国现有糖尿病患者9240万，居全球第1位。^[2]长期的高血糖可导致CD4、CD4/CD8、B细胞、NK细胞显著性减低，^[3]机体免疫功能下降，从而引起糖尿病并发症如肺结核、肾病等疾病的发生。糖尿病并发症累及多个器官，致残、致死率高，严重影响患者的身心健康，并给个人、家庭和社会带来沉重的负担。

蜂胶是蜜蜂采集植物的树脂，并混和自身的唾液和蜂蜡，咀嚼而成的一种有粘性的胶状物质。具有抗菌消炎、抗病毒、抗真菌、排除毒素、增强免疫、软化血管、净化血液、改善微循环、抗氧化、抗肿瘤、抗细胞毒素、局部麻醉、促进组织再生等广泛的生物学作用。

本实验以蜂胶类黄酮为处理因素，以糖尿病小鼠为实验对象，观察蜂胶类黄酮对糖尿病小鼠免疫系统调节机制的影响，以动物实验为基础，推论蜂胶对糖尿病患者的作用，为减少糖尿病及其并发症的发生、发展提供科学依据。

1材料与方法

1.1 实验动物与材料

以健康的清洁级CD-1昆明小鼠为实验动物，全部为雄性，体重均为18～22g之间，以减少实验中的误差。蜂胶软胶囊为湖南明园蜂业生产的不含其他药物成份的纯蜂胶制剂，产品标准号为Q/OKDE 006，卫生许可证号为湘卫食准字[2006]第430000-000077号，安慰剂为湖南明园蜂业生产的不含蜂胶成分的蜂胶溶剂油胶囊。

1.2 试验方法

（1）先将小鼠造模，造模采用试剂为四氧嘧啶，将小鼠禁食12小时后，腹腔注射四氧嘧啶185mg/Kg，一周后测血糖，随机血糖>11.1mmol/L者为糖尿病小鼠，连续四周监测所有小鼠，直到所有小鼠出现糖尿病症状或者死亡。造模成功后，将糖尿病小鼠随机分配到四个不同的处理组，以0.2ml/10g・BW的容量给小鼠灌胃，A组为对照组，对照组灌胃不含蜂胶的溶媒；B组、C组和D组分别灌胃低剂量（175mg/Kg・BW）、中剂量（350mg/Kg・BW）和高剂量（700mg/Kg・BW）的蜂胶，灌胃30天。

（2）实验结束时，无菌取脾后制成细胞悬液，使用“MTT法”检测淋巴细胞的增殖转化能力。采用加ConA孔的光密度值D（570nm）减去不加ConA孔的光密度值D（570nm）指标表示。

（3）使用二硝基氟苯诱导小鼠的迟发型变态反应（DTH），比较各组小鼠耳廓肿胀度。具体步骤：在实验结束前6d将小鼠腹部皮肤脱毛约3cm x3cm的范围，将DNFB均匀涂抹于小鼠脱毛部分的腹部皮肤致敏，6d后再次将DNFB涂抹于小鼠耳部，24h后处死小鼠，剪下小鼠耳壳，称重，以小鼠耳壳的重量来表示迟发型变态反应是否发生及其发生程度如何。

1.3 统计学方法

收集到的资料类型为计量资料，采用SPSS17.0软件进行分析，各组之间的比较采用方差分析的统计方法进行。

2 结果

2.1 小鼠初始体重的比较

在实验前测量小鼠体重，比较各剂量组小鼠实验前的体重均数，发现各组小鼠体重差异无统计学意义（P>0.05），小鼠初始体重在各组间分布均衡；造模后，由于糖尿病对小鼠的影响，小鼠出现体重比造模前减轻的情况。

2.2 蜂胶对小鼠迟发型变态反应的影响

从表1可见，各剂量组的耳廓肿胀度相比差别有统计学意义（P<0.05），在此基础上进行两两比较，四组两两比较P值均等于0.000，这意味着四组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05），且随着蜂胶剂量的增加，耳廓肿胀度越大，表示迟发型变态反应越明显。

2.3 蜂胶对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响

如表2所示，比较四组差值d的大小，结果显示四组差值总的来说有差别（P<0.05），在此基础上进行两两比较发现，高剂量组与中剂量组比较P值为0.025，高剂量组与低剂量组比较P值为0.000，高剂量组与对照组比较P值为0.000，中剂量组与低剂量组比较P值为0.017，中剂量组与对照组比较P值为0.003，低剂量组与对照组比较P值为0.536.除低剂量组与对照组差值d差异没有统计学意义外（P = 0.536>0.05），其余各组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05），即各剂量组间均有差别。

3 讨论

蜂胶（Propolis）是医学宝库的古典名药， 已有数千年的历史。近年来许多科学家对蜂胶的成分进行了研究，发现蜂胶中包含300多种已知的物质，其主要成份为黄酮类、萜类 、酚类 、酯类 、矿物质、维生素、脂肪酸等。^[4,5]黄酮类物质是人体所必需的营养素之一，也是蜂胶最主要的活性成分种类之一。黄酮分子量小，易被人体吸收，能通过血管屏障，进入脂肪组织，它对人体的健康具有广泛的作用，当体内缺乏黄酮时，易导致大脑和心脏功能不全，血管硬化，脆性增强。^[6,7,8]糖尿病在全国乃至全世界已经逐渐成为一种严重危害人类健康的疾病，其并发症累及多个器官，致残、致死率高，严重影响患者的身心健康，并给个人、家庭和社会带来沉重的负担，因此寻求方法帮助糖尿病患者抵抗抵抗疾病本身及其并发症成为了已经迫不及待。在本次研究旨在以动物为研究对象，目的是推断蜂胶黄酮能否对糖尿病有积极的作用，在实验中，我们将小鼠分成四组，分别以零剂量，低剂量（175mg/Kg・BW）、中剂量（350mg/Kg・BW）和高剂量（700mg/Kg・BW）的蜂胶黄酮灌胃，发现蜂胶黄酮确实对糖尿病小鼠的细胞免疫功能有提升的作用，它能促进小鼠的迟发型变态反应，且能促进脾淋巴细胞的转化功能，且蜂胶黄酮对细胞免疫的提升作用随着灌胃浓度的升高而上升。如果能证实蜂胶对人类也有相同的作用，那么蜂胶对细胞免疫的促进作用不仅能帮助糖尿病患者抵抗疾病，在许多其他的疾病治疗中，如感染、恶性肿瘤、自身免疫系统疾病等，也会产生十分重要的影响。

我国是一个蜂胶产品生产的大国，资源丰富，这是蜂胶类产品生产的坚实基础，但蜂胶成分复杂，在蜂胶的医用道路上，还需要大量的研究。

参考文献：

[1] 罗美庄，魏高文，黄丹丹等.蜂胶软胶囊辅助综合干预对糖尿病高危人群生命质量的影响[J].实用预防医学，2008.15（6）.

[2] 魏高文，冯务群，夏晓凯等.蜂胶软胶囊对小鼠糖尿病预防作用的实验研究[J].实用预防医学，2007.14（2）：530-531.

[3] 毛达勇，周有利，朱名安等.2型糖尿病伴感染患者细胞免疫和体液免疫的研究[J].郧阳医学院学报，2003.22（5）：274-277.

[4] 高畅，楚勤英，唐志雄等.蜂胶对糖尿病大鼠创面愈合的影响[J].感染、炎症、修复，2008.9（1）：25-28.

[5] 李雅晶，茹建甫.蜂胶桑叶复合片对2型糖尿病病人糖脂代谢的调节作用[J].安徽农业科学，2010.38（36）：20611-20613.

[6] 孔庆峰，许志形，邓玉文.国内蜂胶黄酮的药理学研究近况[J].实用医药杂志，2006.23（8）：1003-1004.

[7] 于琴，董文宾，王顺民.甘草渣中黄酮类成分提取工艺的研究[J].食品工业，2005（3）：20-22.

[8] 闫亚美，吴珍红，缪晓青.蜂胶黄酮特性及其提取鉴定研究[J].毒理学杂志，2007.21（2）：163-164.