蜂胶对慢性酒精性肝损伤的保护作用及其机制研究

【摘要】目的探讨蜂胶对慢性酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组、蜂胶组各10只。对照组用生理盐水灌胃,模型组用56%红星二锅头灌胃,蜂胶组在模型组的基础上同时给予蜂胶1.0 g.kg-1.d-1灌胃,共12 w。12 w后处死大鼠,测定大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的活性。结果(1)血清ALT、AST水平:模型组的AST、ALT水平显著高于对照组(P<0.05),蜂胶组的AST、ALT水平显著低于模型组(P<0.05);(2)肝组织SOD、MDA水平:模型组SOD活性较对照组显著降低(P<0.05),蜂胶组SOD活性较模型组显著升高(P<0.05);模型组肝组织MDA含量显著高于对照组(P<0.05),蜂胶组MDA含量显著低于模型组(P<0.05)。结论蜂胶能通过增强肝组织清除氧自由基的能力,降低肝组织脂质过氧化反应而对慢性酒精性肝损伤产生保护作用。

【作者】 陈小囡

【关键词】酒精性肝损伤 超氧化物岐化酶 丙二醛 蜂胶

蜂胶成分复杂,其中含有黄酮类、萜烯类、脂类等多种化合物和多种维生素及微量元素^[1-2]。研究表明,黄酮类化合物不仅可以清除机体内的自由基,而且对脂质的过氧化作用有很强的抑制作用。酒精性肝病(alcoholic liver d iesaes,ALD)是指长期大量饮酒所致的慢性肝损伤,包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化以及酒精性肝硬化。为了探讨蜂胶对ALD的护肝作用机制,本文利用大鼠酒精肝模型研究蜂胶对机体内超氧化物岐化酶(Super-oxided ismutase,SOD)活力及丙二醛(Malond ialde-hyde,MDA)含量的影响,为蜂胶的抗酒精性肝损伤作用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康清洁级SD大鼠30只,雄性,体重180~200g,由杭州师范大学动物中心提供。

1.2 主要试剂56%红星二锅头白酒(北京红星酒业股份有限公司),蜂胶(上海星月蜂产品公司)。超氧化物岐化酶测定试盒和丙二醛测定试盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器日立720生化自动分析仪,721型分光光度计。

1.4 酒精性肝损伤动物模型的制作雄性SD大鼠30只,分笼饲养,每笼5只,均用基础饲料喂养。随机分成3组,每组10只。参照文献^[3]中的方法,模型组每天两次用白酒灌胃,第一周剂量为8 m l·kg^-1·d^-1,以后每周递增2 m l·kg^-1·d^-1,直至总剂量达12m l·kg^-1·d^-1后以该剂量持续至12 w结束;蜂胶组在模型组的基础上给予蜂胶1.0 g·kg^-1·d^-1灌胃,共12 w,每天两次。对照组每天用生理盐水10 m l·kg^-1·d^-1灌胃,每天两次。

1.5 SOD、MDA和ALT、AST测定

取新鲜肝组织制成10%的匀浆,比色法检测SOD和MDA活性;剖杀前一天断饲,第二天摘眼球取血,立即3500 rpm离心5min,取血清,血清ALT、AST测定由721型全自动生化分析仪完成。

1.6 统计学方法

所有数据采用SPSS11.0软件进行处理,各指标测定值采用x±s表示,组间差异显著性采用均数t检验,设定P<0.05为差异具有显著性。

2 结果

2.1 一般情况模型组

大鼠灌酒后行动迟缓,少数大鼠出现昏睡等醉酒状态,1~2h后可缓解,体重增加较对照组缓慢,大便较对照组稀,有的不成形,被毛较干枯蓬乱、缺少光泽,正常组和蜂胶组大鼠动作灵活,毛色光泽度均良好。

2.2 血清ALT、AST的水平比较见表1。表中结果显示:模型组与对照组比较,AST、ALT显著升高(P<0.05),说明模型组肝细胞有明显损伤,造模成功;蜂胶组AST、ALT显著低于模型组(P<0.05),表明蜂胶对酒精性肝损伤具有保护作用。

2.3 大鼠肝组织SOD活性和MDA含量比较见表2。表中结果显示:模型组肝组织SOD活性较对照组显著降低(P<0.05),蜂胶组肝组织SOD活性较模型组显著升高(P<0.05),说明蜂胶能提高ALD大鼠肝组织内SOD活性,增强其清除氧自由基的能力;模型组肝组织中MDA含量显著高于对照组(P<0.05),蜂胶组肝组织中MDA含量显著低于模型组(P<0.05),表明蜂胶能降低ALD大鼠肝组织内脂质过氧化反应。

3 讨论

机体抗氧化系统主要由两类物质组成:第一类主要为链式反应阻断剂,如维生素C;第二类主要为抗氧化酶,如SOD,这两类物质协同维持体内自由基生成与清除的平衡。SOD是生物体内的主要抗氧化剂,其主要作用是清除生物氧化产生的自由基而起保护细胞的作用,其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力,是反应抗氧化损伤的主要指标;而自由基对细胞的损伤程度可通过脂质过氧化的降解产物—MDA含量间接推断。因此测定MDA和SOD的变化可反映药物抗氧化能力。

蜂胶是公认的天然抗氧化剂,含有丰富的黄酮类化合物、不饱和脂肪酸、维生素E、维生素C及微量元素锌、硒等物质,因而具有清除自由基、降血脂、抗氧化等作用。已有研究^[4-5]表明蜂胶可明显提高过氧化氢酶、SOD活性,阻止自由基的形成,促进自由基的清除,从而降低MDA含量。

本实验研究表明,ALD大鼠肝组织内SOD活性较正常对照大鼠明显降低,MDA明显升高;用蜂胶灌胃12周后,ALD大鼠肝组织内SOD活性明显升高,MDA明显下降,说明蜂胶具有抗氧化,清除氧自由基的能力,抑制脂质过氧化,从而减轻氧自由基诱导的肝细胞破坏。分析其机制可能有:①蜂胶中含有丰富的维生素C,其为天然的抗氧化剂和自由基清除剂^[6];②蜂胶中丰富的黄酮类化合物可明显提高过氧化氢酶、SOD活性。其确切机制还有待进一步实验证实。

参考文献：

[1]张国文,魏永春,佘集凯,等.蜂胶对小鼠睾丸及卵巢组织过氧化物歧化酶活性的影响[J].时珍国医国药,2004,15:70.

[2]钟立人,韩文辉,张燕萍.蜂胶抗氧化性能的研究[J].中草药,2002,9:803-804.

[3]俞利平,陈小囡,方志明.丹参注射液对大鼠酒精性肝损伤血清ALT、AST的影响[J].中国中医基础医学杂志,2004,10:62-65.

[4]Liu CF,Lin CH,Lin CC.Antioxidative natural product protect a-gainst econazole-induced liver injuries[J].Toxicology,2004,196:87-93.

[5]Okutan H,Ozcelik N,Yilmaz HR,et al.Effects of caffeic acid-phenethyl ester on lipid peroxidation and antioxidantenzymes india-betic rat heart[J].Clin Biochem,2005,38:191-196.

[6]熊正英,张全江.维生素C抗氧化作用及其在运动中的应用[J].陕西师范大学学报,1998,26:109-112.