蜂胶对大鼠实验性牙周炎的治疗效果

【摘要】目的：较为全面的探讨蜂胶对牙周炎大鼠临床症状,血液等方面的影响。方法：78只诱导成功的牙周炎大鼠模型,随机分成6组:即口泰(阳性对照)组,溶剂对照组,模型组以及3个蜂胶剂量组,每组13只。另取同龄大鼠13只为正常对照组。在成功诱导牙周炎后各组处死1只作模型对照,每组12只动物进入正式实验,4周后,观察蜂胶治疗牙周炎效果。结果：用蜂胶治疗后,各实验组牙龈未见自发出血,其中蜂胶低剂量组应用蜂胶1周时,牙龈红肿消退,溃疡愈合,萎缩修复;蜂胶三剂量组的探诊出血阳性率SBI,菌斑指数PLI,探诊深度PD,牙槽骨吸收值ABL和牙齿松动度TM显著低于模型组,表明蜂胶有较强的抗炎消肿、止血作用,并且能明显改善大鼠牙周炎临床症状;蜂胶低剂量和中剂量治疗组白细胞数与模型组比较,差异显著;中性粒细胞与模型组比较,阳性对照组和三个蜂胶治疗组均表现出极显著差异,表明蜂胶对炎性反应具有控制作用。结论：蜂胶可以明显改善大鼠牙周炎的临床症状,尤其以低剂量效果显著。

【作者】 刘志勇  谢国秀  刘昌英  唐震  曾志将

【关键词】蜂胶 牙周炎 大鼠

蜂胶(bee propolis)是蜜蜂从胶源性植物上采集的树脂再混合蜜蜂上额腺、舌腺、蜡腺的分泌物加工而成的胶状物质,具有多种生物学活性成份,如有机酸、生物黄酮类、双萜类等物质,因而成为养蜂生产的一种主要产品,蜂胶研究与开发利用已成为一个热门领域。蜂胶具有抗菌、抗病毒、抗炎症、局部麻醉、降血压、增强免疫力等作用,已有实践中应用蜂胶治疗口腔溃疡等病,作者应用蜂胶提取物观察了蜂胶对大鼠实验性牙周炎的治疗效。

1 材料和方法

1.1 实验动物与分组选用78只牙体牙列完整,无龋坏及牙周病的5周龄SD大鼠,雌雄各半,体重200±20g,由湖北省实验动物研究中心提供[SCXK(鄂)2003-0005]。随机分成正常对照组,模型组,口泰(阳性治疗)组,溶剂对照组,蜂胶三个剂量组:0.5、1.0和1.5mg/kg,每组13只大鼠(其中1只在造模2周后处死,取病理材料),分笼饲养在已取得屏障环境使用许可证的设施中[SYXK(赣)2003-0003]。

1.2 药品试剂与主要仪器

白砂糖,配成10%糖水作为饮用水,常规饲料,喂时用此糖水浸泡成软饲料。眼科及手术器材一套;注射器;体视镜;动物全自动血球计数仪,南昌特康科技有限公司;口泰(复方氯己定含漱液),深圳南粤药业有限公司,批号:20060704,国药准字H10920104。

1.3 造模方法

以文献方法^[1,2]加以改进:以一把大镊子开口,以眼科用弯剪对两侧牙齿周围牙龈进行划割剥离,然后喂以用10%的白砂糖水、并喂白砂糖水浸泡的软饲料,造模结束改用正常饮食,每天观察动物状况。

1.4 给药方法

蜂胶用聚乙二醇配成0.5%,1%,1.5%三种浓度的蜂胶应用液,每天两次口腔内滴注,用药后禁饮食4h。

1.5 观察指标

1.5.1 牙周炎动物表现

观察实验大鼠的口腔牙龈332实验动物与比较医学Laboratory Animal and Comparative MedicineOct.2008,28(5)组织有无充血、出血、肿胀、溢脓、溃疡、糜烂等表现。大鼠牙齿、牙龈病理标本制备:分别于两周时每组处死一只动物立即分离造模侧第一磨牙及牙龈,10%福尔马林固定,牙齿经甲酸脱钙,乙醇系列脱水,HE染色,光镜观察牙周组织病理改变和牙槽骨的吸收情况。

1.5.2 临床指标的观察^[3~5]

龈出血指数(sulusbleeding index,SBI):用探针轻探选用牙的牙周袋或龈沟10s:不出血,游离龈缘无炎症为0;游离龈缘无红肿,探诊出血为1;游离龈缘发红水肿,探诊出血为2;自发性出血,牙龈明显红肿,溃疡为3。

菌斑指数(plaque index,PLI):用小棉粒蘸菌斑染色剂(2%碱性品红)涂于选用牙上30s后,自来水冲洗10s,观察牙面上紫红色的面积和深浅情况,近龈缘区无菌斑为0,近龈缘区牙面有薄菌斑为1,龈缘或邻面有菌斑为2,龈沟和/或龈缘及邻近面有大量菌斑为3。

探诊深度(probing depth,PD):用自制带有刻度(刻度单位3mm)的细探针探选用牙牙周袋,每牙选近中颊、颊侧、远中颊3个点测量,取均值。

牙齿松动度(Tooth mobility,TM):不松动为0,轻度松动即向颊向松动为1,中度松动即向近远中向松动为2,重度松动即垂直向松动为3。

牙槽骨吸收值(alveolar bone loss,ABL):大鼠处死后,取下头颅,沸水煮,去肉存骨,解剖镜下测量,从釉牙骨质界到牙槽骨嵴顶的长度,每牙选近中舌、舌侧、远中舌3个点测量,取均值。

1.5.3 血液指标的变化

实验结束,所有动物眼眶静脉丛采血0.5ml抗凝,全自动血球计数仪分析血液指标,包括红细胞,白细胞总数及分类,血红蛋白,血小板等18项常规指标。

1.6 统计方法

所得数据使用Excel建立数据库,SPSS11.5进行统计分析。

2 结果

2.1 牙周炎大鼠的表现

各造模组实验后第3天,牙龈组织出现红肿,食欲下降,出现躁动不安,动物体重下降,皮毛疏松不顺,食欲不振,牙龈肿胀暗红,2周后逐渐出现牙周袋形成,3周后动物蜷曲少动,牙周袋进一步加深,牙周袋有食物残渣,触之易出血。对照组无上述症状,体重逐渐增加,毛泽光亮,饮食饮水正常,神态、活动正常。光镜下,模型动物两周时结合上皮根向增殖,有大量炎性细胞浸润,毛细管扩张充血,胶原纤维紊乱、断裂、丧失,牙槽骨嵴顶顶吸收破坏,牙周炎动物模型诱导成功。

2.2 蜂胶对牙周炎动物临床症状的改善应用

蜂胶治疗2周后,各实验组牙龈无自发出血,其中蜂胶低剂量组应用蜂胶1周时牙龈炎症消退,溃疡消失,萎缩修复,其他两个剂量探诊仍有出血,牙龈游离缘仍有较强炎症表现;治疗4周后,蜂胶各剂量除高剂量组有2只动物仍见探诊阳性,其余基本痊愈,牙周袋基本消失。

表1蜂胶对大鼠实验性牙周炎临床指标的改善

注:与模型组比较,※P<0.05,※※P<0.01;与阳性组比较,☆P<0.05,下表同

由表1可知,经蜂胶治疗后,牙龈出血指数三个剂量蜂胶液具有明显作用,与模型组比较,低中剂量组优于阳性对照组(P<0.01)。高剂量组与模型组比较也有显著差异(P<0.05),但较阳性组差。

在经蜂胶治疗后,菌斑指数与模型组比较均有极显著差异(P<0.01)。

探诊深度,在经蜂胶治疗后牙周袋普遍有愈合倾向,低剂量蜂胶除去1只动物还未完全愈合,其余动物牙周袋基本愈合,各剂量组与模型组比较差异显著,且优于阳性对照组,但无显著差别。

由表2可知,蜂胶对ABL也有显著影响,与模型组比较低剂量具有极显著差异(P<0.01),而中高剂量有显著差异(P<0.05)。三个剂量与阳性组比较差异不大。蜂胶可以明显改善TM,与模型组比较差异具有极显著性(P<0.01),低、中剂量蜂胶优于阳性对照。

从图1可见,正常组大鼠,牙槽嵴顶位于釉牙骨质界下方约0.2mm,边缘光滑;牙周炎模型组大鼠,牙槽骨呈弹坑状吸收,几乎至根尖;口泰组大鼠,牙槽骨呈弹坑状吸收,至根尖2/3处;溶剂对照组大鼠,牙槽骨呈弹坑状吸收,也几乎至根尖;蜂胶低剂量组大鼠,牙槽骨呈浅弹坑状吸收,牙槽嵴顶位于釉牙骨质界下方约0.3mm,边缘光滑;蜂胶中剂量组大鼠,牙槽骨呈浅弹坑状吸收,牙槽嵴顶位于釉牙骨质界下方约0.5mm,边缘光滑;蜂胶高剂量组大鼠,牙槽骨呈浅弹坑状吸收,牙槽嵴顶位于釉牙骨质界下方约0.6mm,边缘光滑。

2.3 蜂胶对牙周炎动物血液学指标的影响

牙周炎动物由于口腔炎症病灶,有可能引起全身的炎症反映,表现在血液指标上,可见白细胞数量增加,其中中性粒细胞增加。

从表3可见,模型动物的白细胞数量和中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophilia,PMN)数量与正常组比较具有显著差异,而在经蜂胶治疗后,白细胞数量与模型组比较差异A:正常对照组B:模型组C:口泰组D:溶剂对照组E:蜂胶低剂量组F:蜂胶中剂量组G:蜂胶高剂量组图1各组大鼠牙齿观测334实验动物与比较医学Labora具有显著意义(其中蜂胶低剂量P<0.01,而中剂量P<0.05,高剂量有降低但未达到显著性差别)。中性粒细胞与模型组比较,阳性对照组和三个蜂胶治疗组均表现出极显著差异(P<0.001)。

3 讨论

目前常用局部刺激或全身因素+局部刺激共同作用制备牙周炎。主要的局部刺激因素有高糖饮食、结扎、手术刺激、口腔接种特异菌等方法,自身因素要应用激素与免疫抑制剂。应用激素或免疫抑制方法造模或是周期长,模型不稳定,或是与临床病理变化不一致,或是操作不方便,易使动物死亡或个体差异大等不足,影响药物疗效的观察和评价。

本实验采用局部剥离加高糖饲料和高糖饮水喂养的方法,使实验动物口腔明显地出现了菌群失调及类似人类牙周炎病理改变。牙龈局部剥离为高糖饲料提供固着点,能使厌氧菌快速增殖,高糖饮水为厌氧菌生长提供良好环境,高糖饲料进一步为厌氧菌生长提供稳定的营养和环境。该方法制备模型方便易行,便于普及,实验周期短,二至三周即可形成典型牙周炎,并可见牙周袋形成,模型稳定,个体差异小。

牙周探诊是牙周病最重要的检查方法,包括探诊深度和探诊出血阳性率等内容。牙龈的炎症和出血以及牙周袋形成是牙周炎最重要的病理改变。探诊深度可反映牙周袋深度的变化,袋深者炎症较重;探诊是否出血是显示牙龈有无炎症较客观的指标,探诊不出血的牙位提示牙周组织处于较健康状态,而出血阳性部位则提示需要继续治疗。本文结果显示,蜂胶高、低剂量组动物的牙周组织中炎症细胞浸润减少,表明蜂胶有抗炎作用;蜂胶各剂量组及口泰组探诊出血阳性率显著低于模型组(P<0.05或P<0.01),且蜂胶高剂量组的探诊出血阳性率显著低于口泰组和蜂胶低剂量组,表明蜂胶有较强的抗炎止血作用;蜂胶三个剂量组均对探诊深度有显著性影响。

由于牙周组织的持续炎症,血液中白细胞总数增加,尤其是以中性粒细胞数量增加为主,通过应用蜂胶,白细胞数量与模型组比较差异显著。中性粒细胞与模型组比较,阳性对照组和三个蜂胶治疗组均表现出极显著差异(P<0.001)。可见蜂胶对炎性反应具有控制作用。

参考文献：

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