蜂胶对蜡样芽孢杆菌的抑菌试验研究

【摘要】研究产自陕西的蜂胶对蜡样芽胞杆菌的抑菌作用。采用琼脂平板扩散法,将10%蜂胶乙醇提取液倍比稀释至0.078%的8个不同浓度组,设乙醇对照组,每组重复3次,记录蜂胶对蜡样芽胞杆菌24h的抑菌直径。产自陕西的蜂胶对蜡样芽胞杆菌的抑菌作用,随蜂胶浓度降低而减弱,其产生抑菌环的最小浓度为0.166mg/ml。产自陕西的蜂胶对蜡样芽胞杆菌有明显的抑菌活性。

【作者】 刘月凤

【关键词】蜂胶 蜡样芽胞杆菌 最小抑菌浓度 MIC

蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物芽孢和枝条上采集的树枝状分泌物并混入蜜蜂上颚腺分泌液和蜂蜡等形成的复合物,近代研究证明,蜂胶含有丰富而独特的生物活性物质,如黄酮类、萜烯类、酮类、酯类、醇类、酚类等,具有抑菌、抗氧化、抗病毒、抗溃疡、调节血压和增强免疫力等生物学和药理作用[1]。对人体有着广泛的医疗、保健作用,现已成为各国学者研究的热点。孟良玉[2]等(2010)在蜂胶提取液对鸡蛋保鲜的效果研究中表明:蜂胶乙醇提取液对蜡样芽孢杆菌有着较好的抑菌作用,高建新[3]等(2008)在对蜂胶与三种化学防腐剂抑菌性能比较的研究中表明,蜂胶对细菌繁殖体和霉菌都有较强的抑菌作用。为揭示产自陕西蜂胶的抑菌效果与抑菌作用的数量关系,我们用产自陕西的蜂胶乙醇提取物对蜡样芽胞杆菌的抑菌作用进行了研究,旨在为其在实际中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 蜂胶购于陕西渭南地区养蜂专业户。蜂胶溶液配制:将蜂胶置于0℃下冷冻,然后将其粉碎成粉末状,用粉碎的蜂胶100g,加95%乙醇300ml,浸泡3d后,摇荡过滤,并配制得10%蜂胶乙醇提取液,备用。

1.1.2 供试菌种蜡样芽孢杆菌(Bacillus cere-us),由西北农林科技大学动物医学院微生物实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 滤纸片制备采用试管稀释法,用无菌水将10%蜂胶乙醇提取液倍比稀释至0.078%的8个不同浓度组,用打孔器将滤纸片打成若干直径为6mm的圆形滤纸片,经干热灭菌后,将无菌滤纸片放入以上各组不同浓度蜂胶乙醇提取液中20min,同时作乙醇对照,取出烘干,备用。

1.2.2 菌悬液的制备挑取活化后的蜡样芽胞杆菌菌落,以0.5麦氏比浊标准进行校正,用无菌生理盐水将细菌浓度制成1.5*108 cfu/ml菌悬液,并分别加入普通琼脂平板(配方:蛋白胨:10.0g,牛肉浸出粉:3.0g,Nacl:5.0g,琼脂:14.0g,pH:7.2±0.2,无菌水:1 000ml)各0.2ml,涂布均匀,以3个/皿等距离放入含有蜂胶醇取液的滤纸片,每个浓度作3个重复样品,于37℃培养24h,观察蜂胶醇取液抑菌情况,并测量抑菌圈直径(mm)。

1.3 统计学方法

以所得数据计算珚X±s,并以回归统计学分析蜂胶醇取液抑菌的MIC。

2 结果与分析

2.1 抑菌圈直径

不同浓度的蜂胶乙醇提取液对蜡样芽胞杆菌的抑菌圈直径,见表1。

从表1可以看出,蜂胶乙醇提取液对蜡样芽孢杆菌有着明显的抑菌效果,蜂胶乙醇提取液稀释至0.312%时,仍有抑菌作用,稀释至0.156%时,观察不到明显的抑菌环。

2.2 最小抑菌浓度(MIC)

通过不同浓度蜂胶乙醇提取物对细菌的抑菌直径作回归分析,见表2、表3。

由表2、表3的回归分析得出,蜂胶乙醇提取液对蜡样芽孢杆菌抑菌作用的回归方程表达式:

B=16.599+2.669A

由此计算出蜂胶乙醇提取液对蜡样芽孢杆菌抑菌作用的MIC为0.166mg/ml。

3 讨论

试验研究中,不同浓度蜂胶乙醇提取液对供试菌种表现出了明显的抑菌作用,其抑菌作用随蜂胶乙醇提取液浓度降低而减弱。蜂胶含有七十余种黄酮类化合物,有维持血管正常渗透性,改善微循环,抗菌,抗病毒,抗肿瘤等重要活性化合物[4],药用价值很高,应用前景非常广阔,其在临床中的具体应用,还有待于我们进一步的研究与探索。

参考文献：

[1]宗伟,戴兆胜.蜂胶药理作用[C].国外医药:植物药分册,1997,(12):151-153.

[2]孟良玉,兰桃芳,王伟,伟.蜂胶提取液对鸡蛋保鲜的效果[J].湖北农业科学,2010,49(2):421-423.

[3]高建新,卢兆芸,薛琳,等.蜂胶与三种化学防腐剂抑菌性能的比较[J].中国消毒学杂志,2008,(3):233-235.

[4]蒋春红,吕武清,胡棠洪.蜂胶的药理作用研究概况[J].中国医药指南,2011,(17):42-43.