蜂王浆软胶囊增强免疫力功能试验研究

摘要:目的观察蜂王浆软胶囊对小鼠免疫功能的影响。方法以小鼠连续灌胃30d为实验对象，检测蜂王浆软胶囊对小鼠碳廓清能力、迟发型变态反应、抗体生成细胞数、血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、NK细胞活性及刀豆蛋白A(Concanavalin，ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力等免疫指标。结果蜂王浆软胶囊对胸腺指数、碳廓清能力、迟发型变态反应、抗体生成细胞数、HC50、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、NK细胞活性及ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化均有显著作用。结论蜂王浆软胶囊能增强小鼠免疫力。

关键词:蜂王浆软胶囊;免疫功能;小鼠。

作者：黄天宏，刘用国，王江融，许娇红(福建省药品检验所福州350001)

蜂王浆〔1〕为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂ApisceranaFabricius及意大利蜜蜂A.MelliferaL.之工蜂咽腺分泌的乳白色胶状物，富含蛋白质(包括各种肽类和游离氨基酸)，多糖等多种生理活性物质。具滋补、强壮、益肝、健脾之功用。长期以来广泛应用于各种医药制剂、保健食品及化妆品。

1材料和方法

1.1样品

蜂王浆软胶囊，规格:500mg/粒。软胶囊内为黄色半固体粘稠状物体。人体推荐用量为每日两次，每次两粒，1日2.0g，按60kg体重折算成0.033g·kg-1。

1.2实验动物和细胞来源

ICR小鼠，雌性，共200只，体重为17～21g，实验动物房合格证号:SYXK(闽)2013-0003。动物室温度:22℃～25℃，相对湿度:55%～70%。YAC-1细胞，由中科院上海生命科学院细胞资源中心购入。

1.3仪器与试剂

1.3.1仪器:

Heraeus低温高速离心机、Biorad550酶标仪、Thermo二氧化碳培养箱、岛津uv2450紫外分光光度计、ESCOA2生物安全柜、莱卡倒置显微镜、MettlerAE200电子天平、96孔培养板(corning)。

1.3.2试剂:

刀豆蛋白A(ConA)、MTT(sigma)，Giemsa染液、Hanks液(pH7.2～7.4)、PBS缓冲液(pH7.2～7.4)、ＲPMI1640细胞培养液(杭州吉诺医药生物科技有限公司)，小牛血清(Gibco)。

1.4实验方法

实验动物按体重随机分成20组，每组10只，每4组为一实验组，每组试验按人日推荐用量的5倍、10倍和30倍分别设0.17.0.33、1.0g·kg－13个剂量组和蒸馏水空白对照组。动物每天按20mL·kg－1体重连续灌胃30d后，测定免疫指标。分别为免疫一组:小鼠碳廓清试验;免疫二组:迟发型变态反应(DTH)检测;免疫三组:抗体生成细胞检测(Jerne改良载片法)和小鼠血清溶血素(HC50)的测定;免疫四组:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)和脏器/体重比值;免疫五组:ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)。均按文献方法〔2〕进行操作。

1.5实验数据

统计方法实验数据以SPSS17.0软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用LSD法进行统计，方差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。

2试验结果

2.1蜂王浆软胶囊对小鼠体重，胸腺指数和脾指数的影响

蜂王浆软胶囊对各剂量组小鼠的体重增长值与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05)，即该样品对小鼠的体重增长无影响。各剂量组脾指数与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05)，高剂量组胸腺指数与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)，提示高剂量组有增加胸腺重量趋势(见表1)。

2.2蜂王浆软胶囊对细胞免疫功能的影响

样品高剂量组与对照组相比，能明显增加左右耳肿胀度差，脾淋巴细胞转化活性并有显著性差异(P＜0.05)(见表2)，提示本实验条件下蜂王浆软胶囊对小鼠脾淋巴细胞转化和迟发型变态反应能力有明显促进作用。

2.3蜂王浆软胶囊对体液免疫功能的影响

蜂王浆软胶囊3个剂量组HC50值和高剂量组溶血空斑数(×103个/全脾)与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)(见表3)。提示本实验条件下对血清溶血素有升高作用，对抗体生成细胞有促进作用。

2.4蜂王浆软胶囊对单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

样品高剂量组碳廓清能力吞噬指数a明显高于对照组，并有显著性差异(P＜0.05)(见表4)。提示本实验条件下蜂王浆软胶囊对小鼠碳廓清能力有提高作用。样品中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组，且有统计学意义(P＜0.05)，提示本实验条件下蜂王浆软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有增强作用。

2.5蜂王浆软胶囊对NK细胞功能的影响

与对照组相比，样品3个剂量组均能提高NK细胞活性，且有显著性差异(P＜0.05)。提示在本实验条件下蜂王浆软胶囊对NK细胞活性有促进作用(见表5)

3讨论

免疫是机体免疫系统对异物或抗原性物质进行特异性或非特异性识别和清理的一种生理学功能。人体的免疫系统由免疫细胞、免疫分子和免疫器官构成，它们相互配合完成特异性免疫和非特异性免疫。细胞免疫和体液免疫属于特异性免疫，腹腔巨噬细胞吞噬能力和NK细胞功能属于非特异性免疫。本实验中DTH试验和小鼠脾淋巴细胞转化试验代表细胞免疫功能，抗体生成细胞试验和血清溶血素试验代表体液免疫功能，小鼠碳廓清能力和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验代表单核-巨噬细胞吞噬功能。

本实验结果表明蜂王浆软胶囊能提高迟发型变态反应和淋巴细胞分化，促进小鼠脾淋巴细胞增殖能力;增强抗体细胞生成，增加血清溶血素;提高碳廓清能力和腹腔巨噬细胞吞噬能力;增强NK细胞活性。结果提示蜂王浆软胶囊对小鼠的细胞免疫，体液免疫和非特异性免疫均有增强作用。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)，提示该样品具有增强免疫力功能，但其增强免疫功能的机制和分子基础尚需进一步研究

参考文献：

〔1〕宋卫中，等.蜂王浆的研究与应用综述〔J〕.亚太传统医学，2006，11:51-54.

〔2〕中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范〔S〕.2003，22-34.