蜂胶、蜂王浆、蜂花粉、蜂蜜抗氧化作用的研究

摘要[目的]比较蜂蜜、蜂王浆、蜂胶、蜂花粉的抗氧化效果，为其今后在抗氧化方面的应用提供理论依据，并指导人们正确地选择具有抗氧化活性的蜂产品。[方法]以蜂花粉、蜂胶、蜂王浆和蜂蜜为材料，采用Sehaa烘箱法和羟自由基清除法测定4种蜂产品的抗氧化活性。[结果]4种蜂产品均具有较强的抗氧化作用。随着时间的延长，它们的POV值升高，在36h内表现出校好的抑油脂氧化的蚊应，其中蜂胶、蜂王浆和蜂花粉的抗氧化效果优于蜂蜜。在一定时间内，蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜均能抑制大豆油的氧化，对羟基自由基的清除率分别为：65.93%、82.08%、26.95%、27.20%。[结论]蜂花粉、蜂胶，蜂王浆和蜂蜜能够清除体内过多的自由基，降长过氧化脂质的生成，是很好的抗氧化产品。

关键词：蜂胶；蜂花粉；蜂王浆；蜂蜜；扰氧化；自出基

作者：玄红专，桑青，沈保涛(聊城大学生命科学学院.山东聊城 252069)

蜂蜜、蜂王浆、蜂胶、蜂花粉是药食兼用的天然绿色食品，研究发现，蜂产品内含有大量的酚酸类物质以及抗坏血酸、类胡萝卜素、过氧化氢酶等物质，具有抗氧化的活性^[1]。但是不同蜂产品其抗氧化活性及抗氧化机理不同。对蜂胶的抗氧化效果研究较多，但是对于蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆的抗氧化效果研究较少，尤其是4种蜂产品之间抗氧化效果的比较更少见。笔者旨在比较蜂蜜、蜂王浆、蜂胶、蜂花粉的抗氧化效果，为今后抗氧化方面应用提供理论依据，并指导人们正确地选择具有抗氧化活性的蜂产品。

1、材料与方法

1.1 试验材料

三氯甲烷，冰酷酸，澳化钾，硫代硫酸钠，重铬酸钾，可溶性淀粉，大豆油，乙醇，H₂0₂，，结晶紫，FeS0₄，7H₂0，稀H₂SO₄，Tris，HCI，重素蒸馏水；蜂胶、蜂花粉、蜂蜜、蜂王浆均购于蜂产品专卖店；其他试剂均为分析纯。

1.2 试验仪器

离心机，旋转蒸发器，烘箱，紫外-可见分光光度计，酸度计，电子天平，研体。1.3试验步骤

1.3.1试剂的配制

三氯甲烷与冰醋酸的混合液(2:3)；饱和碘化钾溶液；0.002mol/L的标准硫代硫酸钠溶液；淀粉指示剂(10g/L)；过氧化氢溶液(1%)：取30%的过氧化氯溶液1.0ml.用水定容到100ml；结晶紫溶液(20pmo/L)：称取0.0816g结晶紫，用水定容到1000ml；Fe²⁺溶液(5mml/L)：称取0.1390gFeSOg·7H，0，加0.6ml稀H，S0，溶解，用水定容到100ml；缓冲溶液Tis-HC1(pH值4.5~7.5)：用HCI调整pH值到5.5。

1.3.2 蜂胶的制备。取5g粉碎后的蜂胶，按1:10(W:V)加人不同浓度的乙醇溶液，室温下浸提24h，离心分离，得到的上清液再放入烘箱中干燥至恒重。

1.3.3 蜂花粉的制备。取8g粉碎后的蜂花粉，按1：10(W：V)加人95%的乙醇溶解，室温下浸提24h后离心，取上清液用旋转燕发器浓缩，然后放入烘箱中干燥至恒重。

1.3.4 蜂王浆、蜂蜜的制备。在冷冻干燥箱中干燥至恒重。

1.3.5 过氧化值(POV)的测定^[2-3]。采用Schaa烘箱法：取一定量的油脂放人烧杯中，按油重的0.02%添加量取不同浓度的样品(或同浓度的不同抗氧化剂)于烧杯中，混合均匀，放人(60±0.5)℃恒温烘箱中，每隔24h测定其过氧化值。

采用国标(GB/T500937-1996)：称取油样2~3g精确至0.01g，置于250ml的锥形瓶中，加人30ml三氯甲烷与冰睛酸的混合液(2：3)，捂匀，再加人1ml饱和碘化钾溶液，立即加塞，轻轻振荡30s，然后放置暗处3min，取出，加人100ml蒸馏水，摇匀，立即用0.002mol/L的标准硫代硫酸钠溶液滴定，至溶液为淡黄色时，加1ml淀粉指示剂(10g/L)，至蓝色消失为终点，同时作空白试验对照。

过氧化值POV的计算如下：

POV₁=(V₁-V₂)xc x 0.1269x100/M

POV₂=POV₁ x 78.8

式中，POV₁为样品的过氧化值(g/100g)；POV₂为样品的过氧化值(mmol/kg)；V₁为样品消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积(ml)；%，V₂为试剂空白消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积(ml)；C为硫代硫酸钠标准溶液浓度(mo/L)；M为样品质量(g)；0.1269为与1.00ml硫代硫酸钠标准滴定溶液相当的碘的质量(g)；78.8为换算因子。

1.3.6 对羟自由基清除的测定^[4-5]：。

（1）样品清除羟自由基方法。在以上体系中，加人一定量的样品提取液后，测定体系吸光度As；未加样品提取液的体系其吸光度为A_D；未加Fenton试剂及样品提取液的体系其吸光度为A，则清除率D按以下公式计算:D=[(A_S-A_D)/(A-A_D)x100%]。

（2）清除羟自由基的测定。在一系列10ml带盖比色管中分别加人4ml结晶紫溶液(20umol/L)、1.0mlFe^2-溶液(5mmo/L)、0.4ml H₂O₂(1%)溶液、1.0ml Tris-HCl溶液(pH值5.5)，用重蒸蒸馏水稀释到10ml并摇匀，放置5min后，在588nm处测定吸光度，计算其与空白参比A₅₈₈之差A4。

2、结果与分析

2.1 蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜在大豆油中抗氧化作用的测定

根据蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜在大豆油中消耗标准硫代硫酸钠溶液的体积计算不同蜂产品的POV，见图1。

图1 不同蜂产品在大豆油中的POV

Fg.1 POV content of difterent bee products in henn oll

由图1可见，在不同时间，蜂花粉、蜂胶、蝉王浆、蜂蜜在大豆油中POV值不同，随着时间的延长，POV值升高，表明油脂氧化程度加深。在36h内蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜表现出较好的抑制油脂氧化的效应，其中蜂胶、蜂王浆和蜂花粉抗氧化效果优于蜂蜜。

表1 蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜对羟自由基的清除率

Thble 1 Seavenging rate of bee pollen，propotis，royal jelly and honey a-gainst hyddruxyl radical

2.2 蜂花粉、蜂胶、蜂王浆、蜂蜜对羟自由基的清除

由表1可见，蜂胶对羟自由基的清除率达82.08%，蜂花粉对羟自由基的清除率为65.93%，蜂王浆、蜂蜜也表现出对羟自由基的清除功效。

3、讨论

油脂发生过氧化反应，从其化学本质来讲主要是油脂中含有的不饱和脂肪酸，尤其是亚油酸和亚麻酸中含有1,4-戊二烯结构，使它们对氧化的敏感性远远超过油酸中丙烯体系，这种氧化作用又受到金属离子如Fe²⁺、Cu²⁺催化氧化反应，但被启动很容易发生链式反应，加速油脂的酸败变质。所以在选用油脂抗氧化剂时应考虑抗氧化剂具有淬灭氧自由基和盔合金属离子的能力，但是目前还没有这类抗氧化剂。蜂产品能抑制Fe²⁺诱导的脂质过氧化作用。从试验结果来看，蜂胶对高温诱导的脂质过氧化反应具有很强的推迟能力，其次为蜂王浆、蜂花粉和蜂蜜。蜂产品之所以有很好的抗氧化作用，是因为其含有丰富的具有抗氧化作用的黄酮类、酚类、萜烯类化合物，不饱和脂肪酸，维生素A、E、C，胡萝卜素及微量元素锌、硒、铜、锰等物质综合协同作用的结果。4种蜂产品中均含有大量的具有很强抗氧化功效的类黄酮类物质，因为黄酮类化合物是以C₆一C₃一C₆，为基本骨架，不同之处是3号碳原子及苯环上取代基的种类和位置不同。其抗氧化主要是通过螯合金属离子和清除自由基以及自身供氢实现的，邻位羟基的存在可使一个羟基供氢氧化成羰基之后易于与邻位的羟基形成分子内氢键，使氧化后的物质稳定，从而中断自由基导致的链式反应^[6]。

蜂胶中含有较多的类黄以及多酚类物质，蜂胶醇提取物和其中的酚类化合物具有较强的抗氧化作用，可以淬灭超氧阴离子白由基和羟基自由基^[7]。体外药理试验表明，蜂胶不仅对氧自由基有抑制作用，而且对Fe²⁺诱导的低密度脂蛋白氧化修饰也有很强的抑制作用。

参考文献

[1]玄红专，胡福曳.14科蜂的抗氧化活性[J].养蜂科技，2008(4)：38

[2]郑永裕.油指过氧化情测定影响因素的实验研究[J].漳州职业技术学院学报，2006(3)：27-29，

[3]张桂娟.浅析过氧化值测定结果的表示方式[J].监督与选择，2006(4)：

[4]杨明惠，刘博红，何丽仙.褪色光度法测定Feron反应产生的羟自由基及其应用[].分析试验室，2006(12)：77-80.

[5]王多宁，张小莉.百合多糖对羟自由基的清除作用[J].陕西中医学院学报，2006(4)：53-55.

[6]陈明之.蜂胶中有效成分的提取及其抗氧化作用研究进展[J].食品研究与开发，20B，24(6)：58-60.

[7]金毅.蜂校黄酮类提取物对培养心肌红胎氧化损伤的保护作用[J].锦州医学院学报，2003，24(6)：17-21.