蜂胶对炭疽杆菌弱毒株的抑菌效果

摘要：为了解产自河南省的蜂胶对炭痘杆菌(Bacillus anthracis) 弱毒株的抑菌作用，采用琼脂平板扩散法将实验分为pH5.5~8.5不同组(蜂胶浓度31%)，以及在pH5.5下将31%蜂胶溶液倍比稀释至0.06%(1：512)及空白组(0%)，在每张滤纸片上滴加蜂胶溶液7uL，记录蜂胶的抑菌效果。结果表明，河南省蜂胶在pH5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5平板上的抑菌环直径依次为(19.16±0.29)、(17.67±0.29)、(14.67± 0.58)、(13.67±0.29)、(14.00±0.00)、(13.33±1.15)、(12.00±0.00)mm，蜂胶浓度分别为15.50%、7.75%、3.88%、1.94%、0.97%、0.48%、0.24%、0.12%、0.06%和0%(空白组)的抑菌环直径依次为(19.50±1.80)、(19.67±1.04)、(17.75±0.35)、(15.67±0.58)、(14.00±2.29)、(13.17±1.04)、(11.83±1.53)、(10.83±1.26)、(9.00±0.00)和(0.00±0.00)mm。说明河南蜂胶对炭痘杆菌弱毒株有明显的抑菌活性，对炭疽杆菌的抑菌活性随pH值增加或浓度降低而减小。

关键词：蜂胶；炭疽杆菌(Bacillus anthracis) ；抑菌效果

作者：孙 斐1，许兵红1，杨小林2，张佑宏2，李进芬1 (1.新乡医学院寄生虫学教研室，河南新乡 453003；2.湖北省农业科学院植保土肥研究所，武汉 430064)

蜂胶是蜜蜂从植物芽苞或树干上采集的树胶 混人蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡后加工制成的树脂状固态物质，含有大量的生物活性物质和微量元素，具有广泛的药理作用。Kujumgiev等研究报道，不同产地的蜂胶虽然在化学组成上有所不同，但抗菌作用基本相同，显示蜂胶抗菌活性为混合物整体效果。He gazi等对产自奥地利、德国和法国三地的蜂胶对比研究发现，三地蜂胶化学组成中各成分比例不同，抗菌活性也不尽相同。近几年，关于蜂胶研究的文献日渐增多。我国对蜂胶抗菌作用的公开报道十分零碎，尚无系统性研究报道，关于河南省蜂胶的抗菌活性，乔智胜等曾报道从蜂胶中分离到 3种对金黄色葡萄球菌(Staphylococeus aureus) 具有抗菌活性的成分，以后再无相关公开报道。我们课题组首次就河南省蜂胶对医学原虫的抗生作用、对常见医学真菌的抗菌作用和对常见医学细菌的抗菌作用进行了系统的研究，现将河南省蜂胶对炭疽杆菌弱毒株的抑菌作用报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 蜂胶溶液配制 将产自河南省的蜂胶溶于95%乙醇，2周后过滤，得蜂胶乙醇溶液，计算得蜂 胶浓度为31%。

1.1.2 应试菌种 炭疽杆菌(Bacillus anthracis) 弱 毒株购自北京生物制品研究所，由本实验室传代保种，使用前接种到pH6.5固体培养基上，37℃恒温培养16~18h备用。

1.2 方法

1.2.1 抑菌活力测定 采用平板滤纸片法，滤纸片直径6.0mm，灭菌干燥后备用。固体培养基采用肉汤培养基，配比如下：牛肉500g(浸液)、蛋白胨10g、NaCl5g、K₂HPO₄、12H₂01g、琼脂20g，加双蒸水至1000mL，调pH至6.5，每个直径7.5cm培养皿加人12mL培养基，制成平板备用。细菌复苏培养后，取培养至对数期细菌配成6x10°CFU/mL菌液，取0.1mL涂于平板上，将滤纸片加7pL蜂胶溶液样品，37℃培养24h后测量记录抑菌环直径。

1.2.2 不同pH蜂胶抑菌实验 设置pH5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5共8个不同的pH值平板实验组，每组3次重复，记录31%蜂胶在不同pH值平板上的抑菌效果。

1.2.3 不同浓度蜂胶抑茵实验 培养基pH5.5时，设置不同浓度蜂胶实验组和空白对照组，蜂胶原液(31%)倍比稀释至1：512，95%乙醇(蜂胶浓度为0%)作对照组，即设置1个空白对照组和9个蜂胶浓度组(浓度为15.50%、7.75%、3.88%、1.94%、 0.97%0.48%，0.24%、0.12%和0.06%)。每组3次重复，分别记录各组的抑菌效果。

1.2.4统计方法所得数据计算x±s，采用：检验对结果进行统计学分析。

2 结果与分析

2.1不同pH下蜂胶对炭疽杆菌的抑菌效果pH5.0时，不适宜炭疽杆菌生长，未观察到抑菌现象。其余各组均有抑菌现象，pH5.5时河南省蜂胶对炭疽杆菌抑菌环直径最大，随pH增加，抑菌环直径变小(表1)。

表1不同pH条件下蜂胶对炭疽杆菌的抑菌环直径

2.2不同浓度蜂胶对炭疽杆菌的抑菌效果

随蜂胶浓度降低，对炭疽杆菌的抑菌环直径变小，蜂胶原液稀释至0.06%时，仍有抑菌环，但环较小。空白对照组未观察到明显的抑菌环(表2)。

表2不同浓度蜂胶对炭疯杆菌的抑菌环直径

3 讨论

蜂胶有着悠久的药用历史，其成分复杂，大约 由55%树脂及树香、30%蜂蜡、10%芳香挥发油、5% 花粉及杂物组成。目前已从蜂胶中分离鉴定的成分有黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醛类、酚类、醚类、有机酸等，还有氨基酸、酶类、维生素类及多糖等物质。蜂胶的化学成分取决于蜜蜂采集树脂的植物和地区，因而不同产地的蜂胶化学组成不同，生物学活性也有差异。温带型蜂胶以欧洲蜂胶为代表，主要成分为黄酮类,如白杨素(Chrysin)、高良姜素 (Galangine)、松属素 (Pinocembrin)、料皮素 (Quercetin)、柚皮素(Naringenin)、咖啡酸(Caffeicacid)、阿魏酸(Ferulaicacid) 等。热带型蜂胶以巴西 蜂胶为代表，主要成分为萜烯类、芳香酸及其酯类、脂肪酸等，蜂胶中独特的黄酮类、萜烯类物质对多种细菌、真菌、病毒和寄生虫等具有抑制和杀灭作用。

本实验结果表明，pH5.5时河南产蜂胶对炭疽杆菌弱毒株的抑菌环直径最大，随pH增加，抑菌环直径变小。随浓度降低，河南蜂胶对炭疽杆菌弱毒株的抑菌环直径变小，蜂胶原液稀释至1：512即0.06%时，仍有抑菌环产生。pH5.5和6.0组抑菌环显著大于其余各pH组(Pc0.01)；pH8.5时河南省蜂胶对炭疽杆菌抑菌环直径最小，与pH5.0~7.5各组差异有统计学意义(P<0.01)；pH6.5-8.0各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结果提示，河南蜂胶对炭疽杆菌弱毒株有明显的抑菌活性，在酸性条件下对炭疽杆菌的抑菌活性较强。这种随pH增高而抑菌活性减弱的变化规律，与课题组前期报道的河南省蜂胶对其他革兰氏阳性菌如溶壁微球菌(Micro- coccuslysodeikticus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococ-cusaureus)、甲型链球菌(Streptococcusriridans)、乙型链球菌(Streptococcus hemolyticus) 、白喉杆菌 (Corynebacterium diphtheriae) 的抑菌结果相一致。而与对真菌白色念珠菌(Candida albicans) 的抑菌作用相反。

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