蜂胶总黄酮对自发性糖尿病大鼠糖脂代谢的影响及抗氧化作用

摘要：目的研究蜂胶总黄酮（TFP）对自发性糖尿病大鼠糖脂代谢的影响。

方法：

将50只自发性糖尿病大鼠按血糖值随机分为对照组、消渴丸组（2000mg·kg－1）、蜂胶总黄酮高剂量组（240mg·kg－1）、中剂量组（120mg·kg－1 ）、低剂量组（60 mg·kg－1）。各组大鼠每天灌胃给药1次，连续8周，对照组灌胃同体积羧甲基纤维素钠溶液。末次给药结束后，禁食12h，乙醚麻醉，腹主动脉取血，检测自发性糖尿病大鼠血清中血糖（Glu）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、糖化血红蛋白（GHb）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、胰岛素（INS）、C肽（C-P）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、游离脂肪酸（FFA）、一氧化氮（NO）及肝糖原水平。结果 与对照组比较，蜂 胶总黄酮高、中、低剂量组血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、丙二醛及肿瘤坏死因子-α水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、胰岛素、C肽及肝糖原含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）；蜂胶总黄酮高、中剂量组糖化血红蛋白及游离脂肪酸水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），谷胱甘肽及一氧化氮含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01），低剂量组则无显著性差异（P＞0.05）。消渴丸组超氧化物歧化酶、肝糖原、一氧化氮及C肽明显升高（P＜0.05或P＜0.01），血糖、丙二醛、甘油三酯及糖化血红蛋白水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），对其他指标则无明显影响（P＞0.05）。

结论：蜂胶总黄酮可明显降低自发性糖尿病大鼠血糖水平，明显改善自发性糖尿病大鼠糖脂代谢及抑制胰岛素抵抗。

杨明 隋殿军 陈文学 杨铭 于德伟 （吉林省中医药科学院，长春130012；长春中医药大学，长春130021）

关键词：蜂胶总黄酮；糖尿病；自发性糖尿病大鼠；糖脂代谢；胰岛素抵抗

蜂胶是工蜂从植物嫩芽中有选择地采集而来的树脂，并混入蜜蜂上颚分泌物以及少量蜂蜡加工而成 的黏胶状混合物^[1]，具有解毒消肿，收敛生肌的作用，用于体虚早衰，高脂血症，消渴等症，是一味既可内服，又可外用的常用中药^[2]。蜂胶中主要包括黄酮类化合物、芳香酸与芳香酸酯、萜烯类化合物、甾体化合物、氨基酸、糖类化合物等成分^[3]。其中，黄酮类化合物为蜂胶有效成分之一。我们从蜂胶中分离纯化出蜂胶总黄酮（TFP），总黄酮含量为52.1%。本实验选 用自发性糖尿病大鼠（GK）作为糖尿病动物模型，探讨TFP对GK大鼠降血糖作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及饲料

GK大鼠50只，雄性，240～280g（上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号2007000518227）。高脂饲料（普通饲料88.2%、猪油10%、胆固醇1.5%、 猪胆盐0.3%，吉林大学动物中心）。

1.2 药品

取蜂胶药材，－4℃～4℃冷冻4～6h，粉碎成粗粉，与蜂胶质量六分之一的乙醇混合，置萃取罐中，萃取压力20～30MPa，萃取温度为40～60℃，萃取3～5h；分离釜压为6.0～7.0MPa；减压回收溶液，得萃取物；减压干燥，粉碎成细粉。采用盐酸-镁粉显色反应鉴定提取物为总黄酮类化合物。以芦丁为对照品采用分光光度计法测定总黄酮含量，以高效液相色谱法测定白杨素、高良姜素的含量，作为本品质量控制的指标。总黄酮含量以芦丁计高于50.0%，白杨素含量高于5.0%，高良姜素含量高于6.0%。实验时用0.5%CMC-Na配成所需浓度。消渴丸（广州中一药业有限公司，批号：NO1166）。

1.3 试剂

葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法，批号：2010017）、总胆固醇测定试剂盒（COD-PAP法，批号：2010008）、甘油三酯测定试剂盒（GPO-PAP法，批号：2010008）（长春汇力生物技术有限公司）；一氧化氮试剂盒（硝酸还原酶法，批号：20100336）、游离脂肪酸测试盒（批号：20100214）、超氧化物歧化酶测试盒（批号：20100709）、丙二醛测定试剂盒（批号：20100708）、谷胱甘肽测定试剂盒（批号：20100707）、肝糖原测定试剂盒（批号：2010114）（南京建成生物工程研究所）；ＲatC-PELISAKit（LOT#C105-09）、ＲatINSELISAKit（LOT#I093-09）、ＲatTNF-αELISAKit（LOT#T041-09）（GroundworkBio-technologyDiagnosticateLtd）。

1.4 仪器

T6紫外可见分光光度计（北京普利生有限公司）；ST－360酶标仪（上海科华实验系统有限公司）；LC－10AVP高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.5 动物分组及给药

取GK大鼠50只，适应性喂养7d后，尾尖取血测血糖，根据血糖值随机分为对照组、消渴丸组（阳性药对照组2000mg·kg－1 ）、蜂胶总黄酮高剂量组 （240mg·kg－1）、中剂量组（120mg·kg－1 ）、低剂量组（60mg·kg－1 ），每组10只。蜂胶总黄酮各剂量组 与阳性药对照组以10mL·kg－1 体重剂量灌胃给药， 每日1次，连续8周，对照组给予同体积的0.5% CMC-Na。给药期间，各组大鼠均继续喂以高脂饲料。每周测量血糖1次。末次给药结束后，禁食12h，乙醚麻醉，腹主动脉取血，检测GK大鼠血清中血糖（Glu）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、糖化血红蛋白（GHb）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、胰岛素（INS）、C肽、肿瘤坏死因子（TNF-α）、游离脂肪酸（FFA），一氧化氮（NO）及肝糖原水平。

1.6 统计学分析

PASWStatistics17.0版统计分析软件，多组之间采用单因素方差分析比较，组间比较采用t检验， 结果以珋x±s表示。

2 结 果

2.1 蜂胶总黄酮对GK大鼠血糖的变化

与模型对照组比较，在各个观察时间点，TFP高剂量组GK大鼠血糖含量均明显降低（P＜0.05或 P＜0.01或P＜0.001）；中剂量组大鼠血糖含量在给药第3周后，出现明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）；低剂量组大鼠血糖在给药第4周后，出现明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），给药前三周低剂量大鼠血糖含量均低于对照组，但无统计学差异（P＞0.05）。阳性药组大鼠血糖含量在给药第4周后，出现明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）。见表1。

2.2 蜂胶总黄酮对GK大鼠SOD、MDA、GSH、TC、TG、HDL-C及LDL-C的影响

与对照组比较，TFP高剂量组与中剂量组大鼠TG、TC、LDL-C及MDA水平均低于对照组（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），HDL-C、SOD及GSH水平明显高于对照组（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）；低剂量组大鼠HDL-C、SOD水平明显升 高（P＜0.05）， TG、TC、LDL-C及MDA水平均明显降低（P＜0.05），GSH高于对照组，但无统计学差异 （P＞0.05）。阳性药组大鼠SOD明显升高（P＜0.01），MDA与TG明显降低（P＜0.05）。见表2。

2.3 蜂胶总黄酮对GK大鼠GHb、肝糖原、FFA、TNF-α、NO、C-P及INS的影响

与对照组比较，TFP高剂量组与中剂量组大鼠GHb、FFA及TNF-α水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），肝糖原、C-P、NO及INS水平则明显升高（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）；低剂量组大鼠GHb、TNF-α明显降低（P＜0.05），肝糖原、INS及C-P水平明显升高（P＜0.05），FFA水平低于对照组，NO水平高于对照组，但均无统计学差异（P＞0.05）。阳性药组GHb明显降低（P＜0.05），肝糖原、 NO、C-P明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。见表3。

3 讨论

在本次实验研究中选用发病机制与临床2型糖尿病的发病机制极为相似的GK大鼠作为糖尿病模型大鼠^[4]。GK大鼠在糖尿病发作后，快速出现高血糖、INS分泌减弱等症状，后期出现视网膜病、微 血管病、神经病、肾病等并发症^[5]。被广泛应用于2 型糖尿病及其并发症的研究中。本实验结果表明，TFP与消渴丸均可明显降低GK大鼠血糖、GHb水平，升高肝糖原水平。提示， TFP与消渴丸均可明显改善糖尿病糖代谢紊乱状况。INS是由胰岛β细胞分泌，它是体内唯一降低血糖的激素，它能促进全身组织细胞对葡萄糖的摄取和利用。C-P与INS呈等分子关系，能真实反映INS分泌水平^[6]， C-P还具有稳定性强、不受外源性INS和血中INS抗体的影响等特点，是自身INS分泌能力的一个良好指标^[7]。本实验结果表明，与对照组相比，消渴丸可明显升高GK大鼠C-P水平，但对INS无明显影响。TFP可明显升高GK大鼠C-P及INS水平。笔者认为GK糖尿病大鼠血糖及GHb水平降低，可能与TFP调节GK糖尿病大鼠胰腺β细胞分泌功能以及肝糖原合成增加有关。

2型糖尿病常伴有脂质代谢紊乱，脂质代谢异常又进一步加重糖代谢紊乱，二者互为因果关系。主要表现为HDL-C水平的降低，TC、TG、LDL-C水平的升高^[8]。本实验结果显示，与对照组比较，消渴丸可明显降低TG水平，TC及LDL-C水平低于对照组，HDL-C水平高于对照组，但无统计学差异。TFP可明显降低GK大鼠TC、TG及LDL-C水平，升高HDL-C水平。提示TFP可明显改善GK大鼠脂代谢紊乱，对糖尿病脂肪代谢并发症具有一定的防治作用。糖尿病患者体内脂质代谢紊乱的同时，也存在自由基代谢紊乱，即MDA升高、 SOD降低的现象。SOD活性和MDA的含量是反映机体氧化水平 的可靠指标，可以间接地反映胰腺损伤的程度 ^[9-11]。GSH是一种低分子自由基、过氧化氢和脂质过氧化物清除剂，是细胞内最重要的清除毒物的内源性物质，体内自由基过多会导致GSH耗竭^[12] 。本实验研究发现，与对照组比较，TFP与消渴丸可明显降低血清中MDA含量，升高SOD水平；TFP可升高GSH水平，消渴丸则无明显影响。表明TFP与消渴丸可增强机体抗氧化能力，保护糖尿病机体免受自由基进一步氧化损伤。

TNF-α是机体重要细胞因子之一，主要由活跃的单核巨噬细胞受脂多糖刺激产生^[13]。TNF-α与 血浆INS水平、葡萄糖代谢及脂质代谢密切相关，高水平的TNF-α可以抑制INS的功能，诱导高INS血症，加强胰岛抵抗^[14]。糖尿病时血中FFA水平也明显升高，升高的FFA可增加组织细胞膜的流动性，使镶嵌在脂质双分子层内的INS受体数量和活性降低，从而降低组织对INS的敏感性，加重INS抵抗^[15]。本实验中，TFP可明显降低GK大鼠TNF-α、FFA水平，表明TFP具有调节INS水平、抑制INS抵抗的作用。

糖尿病血管并发症的发生发展与NO水平下降密切相关^[16]。本实验结果提示，与对照组相比，TFP与消渴丸可明显升高GK大鼠NO水平，降低微血栓的形成。由此可说明，TFP与消渴丸对糖尿病大鼠NO水平具有较好的调节能力。

综上所述， TFP可明显降低GK大鼠血糖水平其降糖机制可能与改善GK大鼠INS抵抗、糖脂代谢紊乱、清除自由基及抗脂质过氧化有关。

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