蜂胶胶囊对小鼠免疫功能的影响

【摘要】目的：探讨蜂胶胶囊对正常小鼠免疫调节作用。

方法：将192只BALB/c小鼠随机分为4批,每批动物分为低、中、高三个剂量组和一个溶剂对照组。其中第一批小鼠进行脏器/体质量比值和小鼠碳廓清实验;第二批小鼠进行抗体生成细胞检测和血清凝血素测定(HC50)和绵羊红细胞诱导小鼠足趾增厚(DTH);第三批小鼠进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;第四批小鼠进行乳酸锂脱氢酶法(LDH)测定NK细胞活性和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验。

结果：高剂量组蜂胶胶囊可提高小鼠碳廓清能力(P<0.05),增强绵羊红细胞诱导小鼠DTH能力(P<0.05),促进NK细胞活性(P<0.05)和血清凝血素的生成(P<0.05),并且能促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力(P<0.05)和抗体生成细胞数的生成(P<0.05);中剂量和高剂量组蜂胶胶囊能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力(吞噬百分率P<0.05;吞噬指数P<0.05);但对免疫器官/体质量比值无明显影响。

结论：蜂胶胶囊对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫和单核-巨噬细胞功能和NK功能有促进作用,即具有增强免疫力功能。

【作者】 李立1  王勇 2 王亚东1  陈东方1  张焱1  王海玉 1

1河南省疾病预防控制中心，河南郑州 450016  2 河南警察学院，河南郑州 450000

【关键词】 小鼠

蜂胶是指蜜蜂从树皮、树芽或其他植物的幼芽上采集的树脂,在蜜蜂加工时,混入腭腺分泌物和蜂蜡及其他有效成分而形成的一种粘稠胶状物质,是蜜蜂生存和繁殖所必需的物质,为蜂群的副产物^[1]。由于蜂胶含有大量的生物活性物质和微量元素,具有多种生物学功能,目前被开发利用于多种用途,如抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、降血糖、保护肝损伤及免疫调节作用^[2-5]。但研究表明不同产地、不同植物来源和不同蜜蜂种类的蜂胶,其生物学活性不同^[6,7]。因此,本研究以河南产蜂胶作为受试物研究其对小鼠免疫功能的影响,为开发有人类食用价值的保健食品提供动物实验依据。

1 材料与方法

1.1 受试样品

蜂胶胶囊由某保健品有限公司提供;每粒胶囊0.45g,含蜂胶0.125g。

1.2 实验动物及细胞来源

BALB/c雄性小鼠,192只,体质量18～22g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,合格证号:0154716,清洁级。YAC-1细胞(NK细胞活性测定用):上海市疾病预防控制中心馈赠。

1.3 主要仪器与试剂

ADVIA1200全自动生化仪(拜耳);超净工作台(Baker);二氧化碳培养箱(美国);高压灭菌器(美国REVCO);倒置显微镜(上海光学仪器厂);显微镜(日本NIKON);离心机(北京医用离心机厂);Multiskan酶标仪(芬兰);小牛血清(Hyclone公司产品);RPMI1640、刀豆蛋白A(ConA)、琼脂糖和MTT(均为美国Gibco公司产)。

1.4 给药方法^[8]

将小鼠随机分为四批,每批动物按体质量随机分成4组:低剂量组(0.075g/kg)、中剂量组(0.150g/kg)、高剂量组(0.45g/kg)和溶剂对照组(色拉油),每组12只。经口灌胃给予受试物,每天一次,灌胃量20ml/kg体质量,连续给予30d后测定免疫指标。

1.5 免疫指标测定

第一批动物进行脏器/体质量比值、小鼠碳廓清实验;第二批绵羊红细胞(SRBC)诱发小鼠(足跖增厚法)、抗体生成细胞检测(Jerne改良载片法)、血清凝血素-半数溶血值(HC50)测定;第三批动物进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法);免疫四批进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定,均按文献^[8]方法。

1.6 统计分析采用SPSS13.0进行方差分析,用实验组和对照组间均数的两两比较方法统计。按方差分析的程序先对数据进行正态性检验和方差齐性检验,对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态和方差齐性要求后,用转换的数据进行统计,检验水准定义为α=0.05。

2 结果

2.1 蜂胶胶囊对小鼠脏器/体质量比值和细胞免疫功能的影响

见表1。由表1可知,与溶剂对照组相比,三个剂量组的脾脏/体质量和胸腺/体质量比值均无明显变化(P>0.05);高剂量组小鼠淋巴细胞转化活性和24h足跖肿胀度与溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),提示本实验条件下蜂胶胶囊对小鼠的脾淋巴细胞转化和迟发型变态反应能力具有明显的促进作用。

2.2 蜂胶胶囊对小鼠体液免疫功能的影响

见表2。由表2可知,高剂量组的HC50和溶血空斑数(个/全脾)均明显高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示本实验条件下蜂胶胶囊对小鼠半数溶血值具有升高作用,对小鼠抗体生成细胞的生成有促进作用。

2.3 蜂胶胶囊对小鼠非特异性免疫功能的影响

见表3。由表3可知,中、高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于溶剂对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05),提示本实验条件下蜂胶胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有增强作用;高剂量组碳廓清能力吞噬指数a高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示本实验条件下蜂胶胶囊对小鼠的碳廓清能力有提高作用;与溶剂对照组相比,高剂量组的小鼠NK细胞活性升高,差异具有统计学意义(P<0.05),提示本实验条件下蜂胶胶囊对NK细胞活性有促进作用。

3 讨论

蜂胶是医学宝库的古典名药,有数千年使用历史。目前已从蜂胶中分离鉴定出多种生物活性物质,包括黄酮类、醇类、萜烯类、醚类、酚类、酯类、醌类、有机酸和酶类、大量氨基酸、维生素A和维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E以及矿物质等。其中分离鉴定的黄酮化合物有30余种,包括白杨素、柚柏杨素、芹菜素、金合欢素、槲皮素、高良姜素、芦丁、山奈酚等,蜂胶大部分的生理及药理功能都与此类化合物有密切关系^[9,10]。

免疫是机体免疫系统对异物或抗原性物质进行特异性或非特异的识别和清理的一种生理学功能。人体的免疫系统由免疫细胞、免疫分子和免疫器官构成,它们相互同配合完成细胞免疫、体液免疫和特异性免疫功能。当外来抗原物质侵袭机体或机体内的细胞发生异常改变,细胞免疫通过形成细胞因子来识别和清除异物;体液免疫通过产生抗体来对抗抗原物质。一个溶血空斑的形成代表一个抗体生成细胞,溶血素的多少反映产生抗体的量,因此这两个实验能反映机体的体液免疫功能^[11]。单核-巨噬细胞的吞噬能力的强弱代表机体非特异性免疫功能,当细菌、异物等物质进入机体后,迅速被吞噬,因而巨噬细胞廓清指数的多少可以反映其吞噬功能的大小,本实验结果表明蜂胶胶囊能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力和小鼠碳廓清的能力,增强小鼠NK细胞的活性,提示蜂胶胶囊可以提高小鼠的非特异性免疫功能;该实验中蜂胶胶囊能促进抗体生成细胞数量的增加和增加血清溶血素的量,提高小鼠的体液免疫能力;迟发型变态反应和淋巴细胞的分化增加体现了机体的细胞免疫功能,在本实验中蜂胶胶囊能增强小鼠的迟发型变态反应、促进小鼠脾淋巴细胞的增殖能力。结果提示蜂胶胶囊对小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫均具有增强作用,按照保健食品检验与评价技术规范,此胶囊具有提高免疫力的功能。但其增强免疫功能的机制及对免疫分子的作用尚需进一步研究。

参考文献：

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