蜂胶黄酮对D-半乳糖致老年痴呆小鼠抗氧化能力的影响

【摘要】 目的：探讨蜂胶黄酮(EEP)对D-半乳糖致老年性痴呆(AD) 小鼠脑指数、脑组织单胺氧化酶B(MAO-B)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响。方法：60只健康昆明小鼠随机分成6组，分别为正常组、模型组、阳性对照组及高中低3个剂量蜂胶黄酮治疗组。正常组常规喂养，其余组皮下注射D-半乳糖100 mg·kg-1·d-1，共7w，阳性对照组造模同时灌胃50mg·kg-1·d-1茴拉西坦胶囊;治疗组3个剂量(300、150、75mg·kg-1·d-1)每天灌胃蜂胶黄酮;模型组灌胃等体积的生理盐水。第50天处死小鼠取脑，测其脑指数及脑组织MAO-B，SOD，GSH-Px含量的变化。结果：实验组的脑指数显著高于模型组(P<0.05)，SOD，GSH-Px活性显著高于模型组(P<0.01)，MAO-B含量显著低于模型(P<0.01)，与正常对照组比较，各指标相近。结论：蜂胶黄酮能提高脑指数，增强抗氧化能力，抑制MAO-B活性，从而保护脑细胞，抵抗痴呆。

【关键词】 蜂胶黄酮;D-半乳糖;老年性痴呆;脑指数

老年痴呆是威胁人类健康的主要杀手之一，65岁以上老年人患病率为3%~8%，80岁以上老年人患病率高达20%^[1]，其病因、病理机制等尚不明确，治疗标准仍不统一。蜂胶黄酮(EEP)是蜂胶中所含的主要有效成分之一，药理作用广泛。研究表明其具有清除自由基、抗脂质过氧化、促进脑血液循环、改善脑组织代谢等作用^[2]。但目前还未见有关EEP抗老年痴呆的报导，本实验旨在探讨EEP对老年痴呆小鼠的作用，为其治疗老年痴呆方面的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料与仪器EEP由黑龙江中医药大学生化教研室采用醇提取获得，黑龙江省中药研究所鉴定并测定含量;细胞超声粉碎机购自宁波科生仪器厂;高速低温离心机D-37520为德国HERAEUS公司产品;7600-20全自动生化分析仪为日本日立公司产品。D-半乳糖为Sigma公司产品;单胺氧化酶-B(MAO-B)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;蜂胶软胶胶囊为某公司产品(批号:20081023，0.1g/粒);其他试剂均为市售国产分析纯。

1.2实验动物昆明健康小鼠(雌雄各半，体重22~ 25 g)由哈尔滨医科大学动物中心提供。

1.3方法将60只小鼠随机分为6组：正常组，模型组，阳性对照组(茴拉西坦胶囊组)、EEP高、中、低3个剂量治疗组，每组10只。正常组以普通饮食喂养，其余组小鼠腹腔注射D-半乳糖100mg·kg-1·d-1，连续7w，建立小鼠AD模型。同时，高、中、低剂量治疗组每天分别灌胃蜂胶黄酮300、150、75mg/kg，阳性对照组每天灌胃50mg/kg茴拉西坦胶囊，模型组灌胃等体积的生理盐水。第50天断头处死小鼠，开颅取脑，称重，从断头至称重在5min内完成。根据公式计算脑指数，脑指数=(脑重/体重)×100%。按重量体积比(1∶9)加生理盐水制成10%脑组织匀浆液，3000r/min,离心10min，4℃，取上清液，用日本日立7600-20全自动生化分析仪，按试剂盒说明检测MAO-B、SOD及GSH-Px。

1.4统计学处理应用SPSS17. 0统计软件进行方差分析及t检验，全部数据用x±s表示。

2 结果

2.1蜂胶黄酮对脑指数的影响模型组小鼠脑指数较低(4.52±0.63)%，与正常组(5.16±0.79)%比较，差异有显著性(P<0.05);高、中剂量实验组及阳性对照组脑指数较高〔(5.08±0.74)%，(4.98±0.65)%，(4.92±0.36)%〕，与模型组比较差异显著(P<0.05)，与正常组比较，无显著性差异，低剂量EEP组〔(4.56±0.89)%〕与模型组无显著差异。

2.2蜂胶黄酮对脑中MAO-B、SOD、GSH-Px的影响高、中剂量治疗组脑中MAO-B的含量明显低于模型组(P<0.01)，与正常组持平，而模型组MAO-B的含量显著高于正常组(P<0.01)。正常组脑中的SOD的含量明显高于模型组(P<0.01);治疗组中高、中剂量SOD含量明显高于模型组(P<0.01)，与正常组接近，低剂量组显著高于模型组(P<0.05)。各EEP治疗组的GSH-Px含量明显高于模型组(P<0.01);与正常组相比，EEP高剂量治疗组GSH-Px含量显著升高(P<0.05)，中、低剂量组与之比较，差异不显著;模型组GSH-PX含量明显低于正常组(P<0.01)，见表1。

3 讨论

痴呆的主要特征是脑萎缩，脑重量减轻，体积缩小，脑沟回变窄，脑裂增宽，脑室扩大。脑萎缩的主要原因是神经元数量的减少，所以脑指数可以有效地反映脑组织的变化。MAO能催化各种单胺类化合物的氧化脱氢作用，生成醛、氨和过氧化氢，分为MAO-A和MAO-B两种，MAO-B活性与年龄呈正相关，随年龄增加而上升，与衰老密切相关3，4〕，而MAO-A则无此种关系。GSH-Px通过特异性地催化还原型谷胱甘肽(GSH)对氢过氧化物的还原反应，而消除细胞内有害的过氧化代谢产物，以阻断脂质过氧化连锁反应，从而起到保护细胞代谢的正常进行的重要作用。目前认为，GSH-Px活性是抗衰老药物的重要指标之一^[3,4]。

SOD是机体内清除自由基的重要抗氧化酶之一，其活力和含量反映了机体清除氧自由基的能力。研究表明，随着年龄的增长，SOD清除氧自由基能力的下降，引起氧自由基及脂质过氧化物(LPO)日益增多，由于生物膜中不饱和脂肪酸被氧化成过氧化物时，可使细胞膜的通透性改变，线粒体、微粒体膜膨胀破裂，造成细胞代谢和功能形态的改变，最后导致机体衰老和老年性疾病的发生。SOD活性亦被认为是抗衰老药物的重要指标之一^[3,4]。由于各类型的痴呆都有脑血流量降低，所以脑血管扩张剂和脑细胞代谢促进剂以改善脑血流，预防梗死和促进代谢作用而广泛使用。中医药对治疗老年痴呆有较好的前景，针对病因进行以气养心、化痰通窍、滋阴补肾等治疗，取得了较满意的疗效。目前EEP对D半乳糖致衰小鼠学习记忆的改善作用及对脑一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的作用已被证实^[5]，本研究通过测定脑指数及脑组织中抗氧化酶等指标，验证了EEP对老年性痴呆模型鼠具有一定的对抗作用，为EEP对老年性痴呆作用机制的研究及临床药物开发提供了实验基础。

【参考文献】

1刘琳琳，周坤福.中医药延缓衰老分子机制研究进展〔J〕.江西中医药，2006;1(1)：57-9.

2徐颖,方金凤,顾岚.蜂胶黄酮清除自由基作用的研究〔J〕.食品工业，2008;1(1):23-5.

3王春霖，郭芳，王永利.自由基与衰老〔J〕.河北医科大学学报，2005;26(4):308-10.

4贾秀月，高艳华，赵晓莲，等.自由基与抗衰老的研究〔J〕.黑龙江医药科技，2007;30(1):75-6.

5张悦,赵蕾,袁丽杰.蜂胶黄酮对D半乳糖致衰小鼠学习记忆及脑组织NO含量NOS和A chE活性的影响〔J〕.中国老年杂志，2008;28(8):1590-2.