蜂胶防龋作用的研究

【摘要】目的:探讨北京蜂胶提取物的防龋效果及其可能的防龋机制。方法:选40个颊面正常的离体前磨牙分为5组,采用连续培养变形链球菌形成“人工龋损”的方法,比较蜂胶水溶液 (5g/L,1.25g/L)、蜂胶醇溶液 (1.5625g/L)、洗必泰 (1.6g/L)、去离子水(对照)处理后所形成的人工龋损的深度及脱矿量。结果:蜂胶醇溶液组和蜂胶水溶液组处理过的牙的龋损深度比对照组变浅,脱矿量明显减少 (P<0.05 ),5g/L蜂胶水溶液组人工龋损深度和脱矿量在所有实验组中最低。结论:北京蜂胶提取物有很好的防龋效果,在龋病的预防中有较高的开发价值。

【作者】 王晶  李玉晶  杨东梅  葛丽华

【关键词】蜂胶 防龋 人工龋 显微放射照相

蜂胶是一种具有广泛药理作用的天然产物,在医学其他领域的应用早有报道^[1]。近年来,国外有少量关于蜂胶对口腔主要致病菌——变形链球菌的抑菌、抑制粘附、抑制葡聚糖形成的体外实验和动物实验报告^[2],但国内的报道甚少。本研究通过连续培养致龋菌形成人工龋的实验,观察北京蜂胶提取物的防龋效果,探讨其可能的防龋机制。

1　材料和方法

1.1　蜂胶来源20g/g水溶性(粉剂)和100g/L醇溶性北京蜂胶提取物均由中国农科院蜂蜜研究所提供。

1.2　试剂的制备制备蜂胶水溶液(5g/L和1.25g/L);蜂胶醇溶液(1.5625g/L),1.6g/l洗必泰溶液。

1.3　牙标本的选择与处理在立体显微镜下选择牙冠颊侧釉质表面无白斑、裂隙和缺损的正畸减数前磨牙40个,拔髓,刮除根周膜,超声清洗。选牙冠颊面中1/3,3ｍｍ×4ｍｍ为实验开窗区,其余部分涂布指甲油保护。用复合树脂封闭髓腔,保存于4℃水中备用。

1.4　菌液的预备

1.4 .1　细菌变形链球菌S.mutans Inbritt(血清型ｃ)和远缘链球菌S .sobrinus BHR(血清型ｄ)为国际参考菌株(我院口腔微生物研究室提供 )。

1.4 .2　培养基配制MS液体高糖培养基600ｍL,分装备用(每个试管中9ｍl)。

1.4 .3　菌液的制备将S.mutans和S.sobrinus标准菌株放在ＭS液体高糖培养基中,微需氧条件下(Ｎ₂∶CO₂=9:1的厌氧罐中 )37℃恒温培养48ｈ,离心,取上清,用ＭS液体高糖培养基调节细菌浓度,使其A=1,备用。

1.5　人工龋实验

将40个标本随机分为5组,每组8个标本。5组牙颊面开窗区分别用去离子水、1.25ｇ/L蜂胶水溶液、5ｇ/L蜂胶水溶液、1.5625ｇ/L蜂胶醇溶液和1.6ｇ/L洗必泰溶液分别处理2次,每次2min,高效紫外灯照射消毒15min。取S.mutans和S.sobrinus菌液各0.2ｍl接种于9ｍＭＳ培养基的试管中,将用各试剂处理过的牙标本分别悬吊其中。牙标本在上述微需氧条件下培养48ｈ后取出,试验区用上述各溶液再分别处理2min,2次后,将标本再悬吊于新鲜的菌液中连续微需氧培养48ｈ,取出全部标本,并彻底灭菌清洗。

1.6　防龋效果的观测

将各组牙标本作垂直于开窗区表面的纵磨片,厚度130μｍ,用CMR软Ｘ射线机拍摄软Ｘ照片,(条件:电压1.5kＶ,电流15ｍＡ,曝光时间12min,显影2min,定影5min),用计算机图像分析系统(KONTRON-M型计算机多功能图像分析仪)及TMR软件对软Ｘ射线照片进行龋损深度和脱矿量的测定,并对各组结果进行统计学(SPSS8.0单因素方差分析)比较。

2　结果

蜂胶醇溶液和蜂胶水溶液的人工龋实验结果见表 1。

表 1　蜂胶醇溶液和蜂胶水溶液的人工龋实验结果

ａ表示与去离子水组有显著性差异;ｂ表示与洗必泰组有显著性差异,p<0.05。

本实验结果显示,蜂胶溶液各组人工龋损深度与对照组 (去离子水组 )相比较浅,脱矿量明显较少,具有显著性差异(p<0.05)。其中,5ｇ/L蜂胶水溶液组的龋损深度和脱矿量在所有实验组中最低,其防龋效果明显优于洗必泰。本实验结果表明:蜂胶有较好的防龋效果,水溶性蜂胶防龋效果显著。

3　讨论

蜂胶是专司采胶的工蜂从枫、椴、杨或柳树等的幼芽、嫩枝和叶柄中采集来的有机物质,添加了唾液分泌物而成。化学研究证明,蜂胶中含有大量黄酮类化合物及人体必需的氨基酸和微量元素^[3]。蜂胶是一种天然的蜂制品,具有广泛的药理作用。作为民间药物,在国内外都有悠久的应用史。由于它良好的药效,安全无毒,受到许多国家医药业的重视。近年来,由于它显著的抑制病原微生物的特点,受到口腔预防医学界的关注。

龋病是一种细菌性疾病。目前公认,牙菌斑是龋病发病的基础,变形链球菌是主要的致病菌。因此,抑制变形链球菌的生长繁殖,控制牙菌斑是防龋的关键^[4]。本研究所采用的体外实验龋的方法是利用主要致龋菌形成人工菌斑致龋 ,较化学方法更接近人自然冠部龋的致龋过程。本研究人工龋实验结果显示,蜂胶醇溶液组和蜂胶水溶液组的人工龋损深度比对照组较浅 ,脱矿量明显较少(P<0.05)。这一研究结果为应用蜂胶防龋提供了实验依据。

本研究选择洗必泰作为阳性对照。洗必泰作为防龋剂缘于其对细菌有明显的抑菌、杀菌作用,防龋的机制与蜂胶相同。本实验中5ｇ/L蜂胶水溶液组人工龋损深度为(38.85±16.59)μｍ与洗必泰组(65.50±30.2)μｍ相比有显著性差异(P<0.05)。5ｇ/L蜂胶水溶液组脱矿量为(932.7± 295.9)VoL%·μｍ,明显低于洗必泰组(1408.9±871)VoL%·μｍ,由此可见,其防龋效果明显好于洗必泰。

关于蜂胶防龋作用机制已有一些研究报道。2000年,KOO等^[5]报道了蜂胶醇溶液对口腔中10种细菌皆有抑菌作用,特别提出蜂胶醇溶液对变形链球菌和远缘链球菌的抑菌作用很强。笔者在以往进行了北京蜂胶的抑菌实验,最低抑菌浓度的测量结果表明:蜂胶醇溶液和蜂胶水溶液对变形链球菌和远缘链球菌皆有很强的抑菌作用。蜂胶醇溶液对变形链球菌和远缘链球菌最低抑菌浓度均为0.78ｇ/L;蜂胶水溶液则分别为3.1626ｇ/L和2.5ｇ/L。依据抑菌实验结果,确定了本实验的制剂浓度。同时 ,蜂胶醇溶液和蜂胶水溶液还具有抑制变形链球菌粘附的作用。IKeno(1991)报道,蜂胶抑制变形链球菌粘附的作用是由于蜂胶抑制葡糖基转移酶的活性,抑制不溶性葡聚糖的合成所致。由此提示:蜂胶不但可以抑制变链菌的生长,而且具有抑制变形链球菌的粘附、减少菌斑附着的作用。所以在本研究人工龋实验中,用蜂胶处理后人工龋损深度和脱矿量明显减少,证明了蜂胶有好的防龋效果。

本研究所使用的蜂胶水提取物是中国农业科学院蜜蜂研究所最新开发研制出来的。在国内外已发表的有关蜂胶防龋的文章中,未见有蜂胶水提取物的报道。通过本研究可以看出,蜂胶水提取物具有以下优点:①防龋效果好,其防龋效果明显好于洗必泰。②蜂胶水提取物包含蜂胶的有效成分,为淡黄色粉末,使用时无牙着色。③由于其溶于水,使用方便,用于人体更安全。因此本研究结果证实了蜂胶水提取物的应用价值,提示了蜂胶作为纯天然的防龋制剂具有广阔的开发前景。

参考文献：

[1]王宗伟.蜂胶的药理作用[J].国外医药植物药分册,1997,12(4):151

[2]IkenoK ,IkenoT ,MiyazawaC .Effectsofpropolisondentalcariesinrats[J].CariesRes,1991,25:347

[3]林志彬.蜂胶的药理作用和临床应用[J].药学通报,1982,17(4):226

[4]陈瑞兰,翟喜平.蜂胶治疗口腔溃疡180例疗效观察[J].兰州医学院学报,1996,4(4):4

[5]KooH ,GomesBPFA ,RosalenPL .InvitroantimicrobialactivityofpropolisandArmicaMontanaagainstpathogens[J].ArchivesofOralBiology,2000,45:141