蜂胶对链球菌的抑菌实验

【摘要】[目的]了解河南蜂胶对3种链球菌的抑菌作用。[方法]设6个不同pH组(蜂胶浓度31%)和8个不同蜂胶浓度组(pH5.5),琼脂平板扩散法记录蜂胶对甲型链球菌、乙型链球菌和丙型链球菌的抑菌效果。[结果]河南蜂胶对甲型链球菌和乙型链球菌有明显的抑菌环产生,对丙型链球菌无明显的抑菌环。河南蜂胶对甲型链球菌和乙型链球菌的抑菌环直径随pH增加而减小,随蜂胶浓度降低而减小。[结论]河南蜂胶对丙型链球菌无明显的抑菌活性,对甲型链球菌和乙型链球菌有明显的抑菌环活性,抑菌活性随pH增加和浓度降低而减弱。

【作者】 曾莉萍  许兵红  李进芬

【关键词】蜂胶 甲型链球菌 乙型链球菌 丙型链球菌

蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物芽苞或树干上采集的树胶混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡后加工制成的树脂状固态物质,含有大量的生物活性物质。Kujumgiev等^[1]研究报道,不同产地的蜂胶虽然在化学组成上有所不同,但抗菌作用基本相同,显示蜂胶抗菌活性为混合物整体效果。Hegazi等^[1]对产自奥地利、德国和法国的蜂胶研究发现,三地蜂胶化学组成中各成分比例不同,抗菌活性也不尽相同。近来蜂胶文献日渐增多,我国对蜂胶抗菌作用的公开报道十分零碎,尚无系统性研究报道,河南蜂胶的抗菌活性更无公开报道。课题组首次就河南蜂胶对常见医学原虫和医学细菌的抗生作用进行了系统地研究^[3～5],将河南蜂胶对3种链球菌的抑菌实验结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 蜂胶溶液配制

将产自河南的蜂胶溶于95%乙醇,两周后过滤,得蜂胶乙醇溶液,测得蜂胶浓度为31%。

1.1.2 应试菌种

甲型链球菌(Streptococcus viridans)、乙型链球菌(Streptococcus hemolyticus)、丙型链球菌(Streptococ-cusnon-hemolyticus)由本实验室提供,使用前接种到pH6.5固体培养基上,37℃恒温培养16～18h备用。

1.2 方法

1.2.1 抑菌活力测定

抑菌活力测定采用平板滤纸片法,滤纸片直径6.0mm,灭菌干燥后备用。固体培养基采用肉汤培养基,配比如下:牛肉500g(浸液)、蛋白胨10g、NaCl 5 g、K₂HPO_4.12H₂O 1 g、琼脂20 g,加双蒸水至1000ml,调pH至6.5,使用时加7%的小牛血清。每个直径7.5cm培养皿加入12ml培养基,制成平板备用。细菌复苏培养后,取培养至对数期细菌配成6×10⁸cells/ml菌液,涂于平板上,将滤纸片加7μl蜂胶溶液样品,37℃培养24h后测量记录抑菌环直径。

1.2.2 不同pH实验

设置5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0共6个不同的pH平板实验组,每组3次重复,所得数据计算x±s,记录31%河南蜂胶在不同pH平板上对上述几种链球菌的抑菌效果。

1.2.3 不同浓度实验

培养基pH5.5时,设置不同浓度蜂胶实验组和空白对照组,蜂胶原液(31%)按1︰2倍比稀释至1︰128,95%乙醇(蜂胶浓度0.0%)作对照组,即设置1个空白对照组和7个蜂胶浓度组:蜂胶原液1︰2稀释组即浓度为15.5%,剂量为1085μg;蜂胶原液1︰4稀释组即浓度为7.75%,剂量为542.5μg;蜂胶原液1︰8稀释组即浓度为3.875%,剂量为271.25μg;蜂胶原液1︰16稀释组即浓度为1.9875%,剂量为135.62μg;蜂胶原液1︰32稀释组即浓度为0.9937%,剂量为67.81μg;蜂胶原液1︰64稀释组即浓度为0.4968%,剂量为33.90μg;蜂胶原液1︰128稀释组即浓度为0.2484%,剂量为16.95μg。每组3次重复,记录各组的抑菌效果。

2 结果

2.1 对甲型链球菌的抑菌效果

2.1.1 不同pH下的抑菌效果

各pH组对甲型链球菌均有抑菌环产生,结果见表1,pH5.5时抑菌环直径最大,随pH增加,抑菌环直径逐渐变小。

2.1.2 不同浓度的抑菌效果

不同蜂胶浓度组中,仅浓度高的3组对甲型链球菌有明显的抑菌环产生,且随蜂胶浓度降低,抑菌环直径变小。蜂胶原液稀释至1︰16即1.9875%时,开始观察不到明显的抑菌环。空白对照组也无抑菌环产生。不同浓度抑菌环直径结果见表2。

2.2 对乙型链球菌的抑菌效果

2.2.1 不同pH下的抑菌效果

各pH组对乙型链球菌均有抑菌环产生,结果见表3,pH5.5时抑菌环直径最大,随pH增加,抑菌环直径逐渐变小。

2.2.2 不同浓度的抑菌效果随蜂胶浓度降低,对乙型链球菌抑菌环直径逐渐变小,蜂胶原液稀释至1︰64即0.4968%时,仍有抑菌环产生但环小。蜂胶原液稀释至1︰128即0.2484%,以及空白对照组,观察不到明显的抑菌环,见表4。

2.3 对丙型链球菌的抑菌效果各pH组对丙型链球菌均无明显的抑菌环产生。

3 讨论

研究结果表明,河南蜂胶对3种链球菌的抑菌效果不尽相同,对甲型链球菌和乙型链球菌有明显的抑菌作用,对丙型链球菌没有明显的抑菌作用。对甲型链球菌和乙型链球菌的抑菌作用均在酸性环境下较强,随pH增加而抑菌活性减弱。这种抑菌活性随pH降低而增强的变化趋势,与课题组进行的河南蜂胶对溶壁微球菌^[4]和对金黄色葡萄球菌的抑菌作用结果类似,却与课题组进行的河南蜂胶对真菌(白色念珠菌)的抑菌作用结果相反(对白色念珠菌的抑菌活性随pH增加而增强)。

河南蜂胶对甲型链球菌和乙型链球菌的抑菌效果随蜂胶浓度降低,抑菌环直径变小。对甲型链球菌蜂胶溶液稀释至1.9875%时,开始观察不到明显的抑菌环。对乙型链球菌蜂胶溶液稀释至0.2484%时,观察不到明显的抑菌环。各pH组和各浓度组实验中,河南蜂胶对链球菌的抑菌环直径均较小,观察到的最大抑菌环直径远小于20mm,与河南蜂胶对溶壁微球菌^[4,5]和对金黄色葡萄球菌^[6]的抑菌作用结果相比较,河南蜂胶对链球菌的抑菌活性明显弱于对溶壁微球菌和对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。

参考文献：

[1] Kujumgiev A,Tsvetkova I,Serkedjieva V,etal.Antibacterial,antifungaland antiviralactivity of propolis ofdifferentgeographic origin[J].J Ethmopharmacol,1999,64(3):235-240.

[2] Hegazi AG,Abdeihady FK,Abdallah FA.Chemicalcomposition and antimicrobialactivity of European propolis[J].Z Naturforsch,2000,55(1-2):70-75.

[3] 许兵红,史明珠,艾予川,等.Effect of propolison Trichomonas vaginalisin vitro[J].中国寄生虫病防治杂志,2005,18(2):116-119.

[4] 许兵红,曾莉萍,李进芬,等.河南蜂胶对溶壁微球菌不同pH抑菌作用研究[J].实用预防医学,2004,11(3):423-424.

[5]曾莉萍,杨献军,许兵红,等.河南蜂胶对溶壁微球菌的抑菌作用研究[J].中国血吸虫病防治杂志,2004,16(6):460、462