蜂胶软胶囊毒理学安全性研究

【摘要】目的:对蜂胶软胶囊的食用安全性进行毒理学评价。方法:采用急性毒性试验、遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验)和30d喂养试验进行评价。结果:雌雄小鼠经口MTD均大于20.0g/kg体重,Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性。30d喂养试验未见大鼠的生长发育、血液学、生化、脏体比及组织病理学有异常变化。结论:蜂胶软胶囊急性毒性分级属无毒级、无遗传毒性,最大无损害作用剂量大于1.5g/kg体重,相当于人体推荐摄入量的100倍。在本实验剂量范围内,蜂胶软胶囊属安全性保健食品。

【作者】 傅颖  梅松  刘冬  来伟旗  陈建国  王茵，（浙江省医学科学院保健食品研究所，杭州310013）

【关键词】蜂胶软胶囊 毒理学 安全性

蜂胶是蜜蜂将采自植物枝条、叶芽及愈伤组织等的分泌物与其上腭腺、蜡腺分泌物同少量花粉混合后所形成的黏性物质。其药理作用十分广泛,国内外研究证明蜂胶具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎、抗溃疡、降血压、增强免疫力以及对心脏和肝脏的保护作用等。蜂胶的成分相当复杂,其中有多种很强的生理活性物质。不同地区的蜂胶所含化合物的种类和数量差别很大,因此具有不同的生理活性^[1]。北京某科技有限公司拟开发蜂胶作为保健食品,为了确保食用安全,我们对其开发生产的蜂胶软胶囊进行了毒理学安全性评价,为蜂胶软胶囊的应用提供实验依据。

1 材料与方法

1·1 材料

1·1·1 受试物

蜂胶软胶囊,450mg/粒,内容物呈棕褐色油状,人体推荐摄入量为每日0·9g/人/天,由北京某科技有限公司提供。以植物油为溶剂配制成所需浓度供小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验、30d喂养试验用,以吐温80为助溶剂配制成乳液供Am es试验使用。

1·1·2 实验动物

选浙江省实验动物中心提供的清洁级健康小鼠和SD大鼠,医学实验动物合格证号:SCXK(浙)2008-0033,医学实验动物设施环境合格证号:SYXK(浙)2005-0074。室温20℃~25℃,相对湿度60%~70%。

1·1·3 菌株

选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门菌,共四株,即TA97 a、TA98、TA100、TA102。由上海市疾病预防控制中心提供,经生物学鉴定合格。

1·1·4 实验仪器电子天平,Abacus全自动血液分析仪,L i-asys全自动生化分析仪,O lympus显微镜,恒温水浴箱。

1·2 方法

1·2·1 大、小鼠急性毒性试验

均按最大耐受量试验方法。实验前隔夜禁食,不禁水。剂量为20g/kg体重,灌胃量为20ml/kg体重,给药后观察2周,判定其最大耐受量(MTD),评价其急性毒性强弱。

1·2·2 遗传毒性

1·2·2·1 小鼠骨髓细胞微核试验:小鼠每组10只,雌雄各半,受试物设3个剂量,2·5g/kg、5·0g/kg、10·0g/kg及阴性(色拉油)、阳性(环磷酰胺40mg/kg)对照组。按文献^[2]介绍的方法进行实验。

1·2·2·2 小鼠精子畸形试验:小鼠每组10只,受试物设3个剂量组,2·5g/kg、5·0g/kg、10·0g/kg及阴性(色拉油)、阳性(MMC1·5mg/kg)对照组。按常规进行实验。

1·2·2·3 Am es试验:采用标准平板掺入法^[1]  在加和不加S9的条件下进行,实验设5个剂量,5000、1000、200、40、8μg/皿,另设阴性(2%吐温溶液)、阳性对照组,阳性物为9-氨基吖啶、2·7-氨基芴、叠氮钠、2-乙酰氨基芴、丝裂霉素C。实验结果以各剂量组与阴性对照组平均回变菌落数的比值(MR)来判断。

1·2·3 大鼠30天喂养试验 动物随机分成4组,每组20只,雌雄各半,受试物设3个剂量组,0·375g/kg、0·75g/kg、1·5g/kg另设阴性对照组,经口给药,按不同剂量要求将样品均匀拌入基础饲料。大鼠2只/笼饲养,自由进食饮水。连续观察30天,每周记录体重和进食量并计算食物利用率,实验期末断头取血、处死,对每只大鼠进行脏器大体观察,同时取肝、肾称重并计算脏体比,同时进行血象、血生化检查,并取肝、肾、胃肠进行病理组织学检查,常规制片,H-E染色。血象按临床常规检验方法,血生化检查取血清用OLYMPUS1000型生化自动分析仪进行测定,血生化试剂盒由上海丰汇生化试剂有限公司提供。

2 结果

2·1 大、小鼠急性毒性试验

实验期间,各大鼠均未出现异常症状、体征,也无死亡。蜂胶软胶囊对雌、雄性小鼠和雌、雄性大鼠经口MTD均大于20·0g/kg体重,属无毒级。

2·2 遗传毒性试验

2·2·1 小鼠骨髓细胞微核试验

结果显示阳性对照组微核率高达1·92%~1·94%,而剂量组的微核率在0·14%~0·18%。与阴性对照组(0·14%~0·18%)相比差异无显著性(P>0·05)(卡方检验),提示蜂胶软胶囊对小鼠骨髓细胞染色体无明显断裂效应。2·2·2小鼠精子畸形试验结果显示各剂量组的精子畸形率在1·60%~1·76%,与阴性对照组(1·88%)相近,而阳性对照组的精子畸形率高达5·88%,提示蜂胶软胶囊对小鼠精子形态无影响。

2·2·3 Am es试验

蜂胶软胶囊各剂量组回变菌落数与阴性对照组比较均无明显差异。未见蜂胶软胶囊有致突变作用。

2·3 大鼠30天喂养试验

2·3·1 生长发育

试验期间,大鼠生长良好,各剂量组大鼠均无异常症状和体征,也无死亡。经方差分析检验,各剂量组动物的体重、进食量、食物利用率与阴性对照组比较无显著性差异(F检验,P>0·05)。

2·3·2 血常规及生化检查血常规检查

显示白细胞(♀:7·72~9·65×109/L,♂:12·14~14·19×109/L)、血色素(♀:150·90~155·50 g/L,♂:150·30~154·20 g/L)、红细胞(♀:6·22~6·75×1012/L,♂:7·03~7·55×1012/L)均在正常范围^[3],各剂量组与阴性对照组比较,差异均无显著性(F检验,P>0·05)。生化指标显示谷丙转氨酶♀:(39·74±12·18)~(46·05±12·71)IU/L、♂:(38·77±11·10)~(51·59±9·95)IU/L、谷草转氨酶♀:(123·82±17·96)~(135·36±18·48)IU/L、♂:(118·52±6·41)~(153·84±26·08)IU/L、血清总蛋白♀:(66·04±2·85)~(67·76±2·61)IU/L、♂:(60·89±2·82)~(65·98±2·35)IU/L、白蛋白♀:(35·48±1·79)~(37·08±1·96)IU/L、♂:(30·79±1·18)~(34·38±1·39)IU/L、胆固醇♀:(2·31±0·44)~(2·64±0·33)IU/L、♂:(1·88±0·20)~(2·05±0·18)IU/L、甘油三酯♀:(0·77±0·29)~(1·26±0·42)IU/L、♂:(1·19±0·31)~(1·54±0·30)IU/L、尿素氮♀:(6·68±1·47)~(8·33±1·14)IU/L、♂:(5·03±0·78)~(6·88±0·81)IU/L、肌酐♀:(39·40±4·20)~(50·60±4·03)IU/L、♂:(42·20±3·68)~(46·60±2·95)IU/L、血糖♀:(5·00±0·41)~(5·57±0·46)IU/L、♂:(5·70±0·60)~(6·61±0·50)IU/L。均在正常范围内,各剂量组与阴性对照组比较,差异均无显著性(F检验,P>0·05)。

2·3·3 病理组织学检查

解剖时大体观察未见异常,脏器系数各剂量组与阴性对照组比较无显著性差异。镜下观察对照组和剂量组动物的肝、肾、胃、十二指肠均未见有意义的病理改变。

3 讨论

蜂胶的化学成分非常复杂,药理活性也很多样。世界各地不同产区蜂胶的化学成分常常有很大的差异^[1]。蜂胶的化学成分依赖于采集地植物的特异性和当地气候特征。一般情况下,蜂胶是由50%~55%的树脂类芳香油、30%~40%的蜂蜡、5%~10%的花粉所组成^[4]。化合物主要包括类黄酮化合物和有机酸类化合物,酯、醛、醇类化合物,以及烯、烃、萜类化合物等。此外,蜂胶内还含有VB1,VPP,VA,VC,VE,多种氨基酸,10余种矿物质和20多种微量元素。蜂胶是不透明的固体,呈棕褐色、棕红色或灰褐色,有时带有青绿色,少数近似黑色。蜂胶表面光滑或粗糙,折断面呈砂粒状,切面与大理石外形相似^[5]。天然新鲜蜂胶有令人喜爱的树脂香味,燃烧时发出乳香气,味微苦、略带辛辣味,嚼之粘牙。蜂胶具有一定的黏性和可塑性,在36℃时开始变软,15℃时变硬变脆、可粉碎,60℃~70℃时融化成黏稠液体,并分离出蜂蜡。蜂胶密度随不同采集植物而异,一般为1·112 g/cm3~1·136 g/cm3^[5]。蜂胶属树脂类物质,极易溶于乙醚、氯仿、丙酮、苯及质量分数为2%的NaOH溶液,溶于体积分数为95%的乙醇。蜂胶溶液呈透明状,但随着蜂胶浓度的增大,有颗粒状沉淀析出。蜂胶的乙醇提取物可反映蜂胶品质的优劣,以及蜂胶的等级。优质蜂胶的乙醇提取物含量一般为75%以上,含量为65%~75%的为一等品,含量为60%~65%的为二等品,含量为55%~60%的为三等品,低于50%的为等外品^[6]。

蜂胶是一种天然的活性物质,具有多种生物学功能^[7-9],已广泛地应用于医药、化工、食品、美容等领域。蜂胶的提取工艺非常复杂,生产过程中有很多的污染机会。为确保蜂胶软胶囊食用安全,依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)^[2]的规定,我们选择了一组试验检测蜂胶软胶囊的急性毒性、遗传毒性和无损害作用剂量。实验结果表明,蜂胶软胶囊雌雄性小鼠经口MTD大于20·0g/kg体重,根据急性毒性分级标准,属无毒级;小鼠精子畸形试验、Am es试验、小鼠骨髓微核试验三项遗传毒性试验结果均为阴性;30d喂养试验显示大鼠体重、总食物利用率、血常规、血液生化指标、脏体比以及肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸和卵巢的病理组织学检查均未见异常改变。得出蜂胶软胶囊的最大无损害作用剂量大于1·5g/kg体重,相当于人体推荐摄人量的100倍。综上所述,蜂胶软胶囊在本研究剂量范围内是毒理学安全的保健食品。

我国是蜂产品生产大国,蜂胶原料来源非常丰富。蜂胶内含有丰富的活性物质,并且具有广泛的药理作用,已经引起了医药和食品界的关注。相信在不久的将来,蜂胶作为一种具有很大开发潜力的天然中药材和药食同源的食品,必将具有非常广阔的市场前景。

参考文献：

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