蜂胶增强小鼠免疫功能的实验研究

[摘要] 目的：探讨蜂胶对小鼠免疫功能的影响。方法：200只雌性ICR小鼠随机分为4组,即低、中、高剂量组和溶剂对照组,分别给予83.3、167.7、500mg/kg的蜂胶软胶囊,溶剂对照组给予色拉油,连续灌胃30d后分为3个亚组,分别检测以下指标:脏器/体重比值、24h耳廓肿胀度、脾淋巴细胞增殖能力、溶血空斑数、半数溶血值、碳廓清能力、鸡红细胞吞噬率与吞噬指数及NK细胞活性。结果：蜂胶软胶囊可增强DNFB引起的小鼠迟发性变态反应和小鼠淋巴细胞增殖能力,提高小鼠B细胞抗体生成和血清溶血素能力,增强小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的能力及提高NK细胞活性;各剂量组蜂胶软胶囊对小鼠体重、免疫器官/体重比值、小鼠碳廓清能力和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无明显影响(P>0.05)。结论：蜂胶软胶囊对正常小鼠免疫功能具有明显增强作用。

[作者] 徐德洲,吕中明,陈新霞

[关键词] 蜂胶;小鼠;免疫功能

蜂胶(Propolis)又名蜂巢腊胶,是蜜蜂从植物幼芽或受伤树干上采集的树脂,混入上腭腺分泌物和蜂腊后经咀嚼加工而成具有粘性的天然胶状物质,含有大量的生物活性物质和微量元素,它的主要成分是黄酮类化合物,此外还有酚类、醇类、酸类、脂类等多种化合物,药理学研究发现,蜂胶具有多种生物学作用^[1]。为了解蜂胶对小鼠免疫功能的影响作用,我们在对其进行毒理学安全性评价的基础上,就其对机体免疫功能方面的影响进行了实验研究,以期为其作为保健食品的开发利用提供科学依据。本文依据卫生部《保健食品的功能学评价程序和检验方法》(2003),对蜂胶软胶囊增强机体的免疫功能进行了研究。

1 材料与方法

1.1 受试物

蜂胶软胶囊,内容物为黄色膏状,由镇江某蜂胶有限公司提供。规格为500mg/粒。成人(按60kg体重计)每日推荐摄入量为1000mg,相当于16.7mg/kg.bw。

1.2 实验动物

健康雌性ICR种清洁级小鼠200只,体重18~22g,上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,动物证号:SCxK(沪)2007-0005号,SPF级实验动物环境设施合格证号:SYXK(苏)2007-0020号。

1.3 YAC-1细胞株由中科院上海细胞所提供。

1.4 仪器与试剂

酶标仪(Bio~Rad)、C02培养箱(Themo)、723分光光度计(Unico)、振荡器(Vonex-2)、超净工作台、恒温 水浴箱、离心机等。试剂:RPMll640细胞培养液(Gibc0)、刀豆 蛋白A(Si舯a)、M1vr(Fluka)、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二 甲酯硫酸盐(PMS)、NAD,试验中所用其它试剂均为分析纯。 Hanks液、PBS缓冲液(pH 7.2~7.4)、SA缓冲液、都氏试剂、印度墨汁、0.2mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.2)等均为自配。

1.5 方法^[2]

1.5.1 动物分组

200只雌性ICR小鼠随机分成5批,每批小鼠按体重随机均分为4组(高、中、低剂量组,对照组),每组10只。实验各组灌胃液用样品加色拉油配制,小鼠灌胃容积为10ml/kg.bw。三个剂量组分别为500、166.7和83.3mg/kg・bw;对照组给予色拉油。连续灌胃30d后检测各项免疫指标。

1.5.2 试验

按照国家卫生部《保健食品的功能学评价程序和检验方法》(2003),进行二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)试验;抗体生成细胞检测和血清溶血素测定;小鼠脾淋巴细胞转化试验和NK细胞活性测定;抗体生成细胞检测和血清溶血素测定;小鼠碳廓清试验;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。

1.5.3 数据处理

所有实验数据采用SPSS11.5软件进行统计学处理,采用方差分析及秩和检验进行统计。

2 结果

2.1 蜂胶对体重和脏器/体重比值的影响

各剂每组小鼠实验前后体重增长、小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与溶剂对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),表明蜂胶对小鼠体重增长及脏器/体重比值的影响不明显。

2.2 细胞免疫功能试验

DTH实验表明各剂量组小鼠的耳廓肿胀度均高于对照组,且随剂量增加而增加。经方差分析及两两比较,中、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。提示中、高剂量蜂胶软胶囊可增强小鼠迟发性变态反应。ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)结果表明各剂量组光密度差值也高于对照组,中、高剂量组差异有统 计学意义(P<0.05)。提示中、高剂量蜂胶软胶囊可增强小鼠淋巴细胞增殖能力,见表1。

2.3 体液免疫功能试验

抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)显示,各剂量组溶血空斑数均高于阴性对照组,高剂量组差异有统计学意义(P<0.01)。提示高剂量蜂胶软胶囊具有增 强小鼠产生抗体生成细胞的能力。血清溶血素试验结果表明,各剂量组小鼠血清半数溶血值(HC₅₀)均高于对照组值,中、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。提示中、高剂 量蜂胶软胶囊具有增强小鼠产生血清溶血素的能力,见表2。

2.4 单核-巨噬细胞及NK细胞功能试验

小鼠碳廓清试验结果表明低、中剂量小鼠碳廓清的吞噬指数a显著高于阴性对照组(P<0.05,P<0.05)。提示蜂胶软胶囊具有增强小鼠碳廓清能力的作用,但无明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力;NK细胞活性表明,各剂量组小鼠的NK细胞活性均高于对照组,中、高剂量组差异有统计学意义(P＜0.01)，表明蜂胶软胶囊具有增强小鼠NK细胞活性的作用，见表3。

3 讨论

蜂胶是祖国医学宝库中的古典名药,已有数千年历史。随着科学技术的发展,对蜂胶的研究与开发日益深入,蜂胶具有广泛的市场潜力。化学研究表明,产地不同的蜂胶尽管化学成分有所不同,但都不同程度地含有大量黄酮类化合物,因此有学^[3-4]认为,可能是黄酮类物质作用于机体免疫器官,刺激其产生T细胞,或是激活F{噬细胞、T细胞、B细胞,从而增加IgM及CD4细胞的产生,激活细胞介导的免疫反应,提高机体免疫力。

本次实验从细胞免疫、体液免疫、单核一巨噬细胞吞噬功能 和NK细胞活性等4个方面,对蜂胶的免疫功能的调节作用进行了实验研究。结果表明,在本实验条件下,蜂胶软胶囊具有增强DNFB引起的小鼠迟发性变态反应和小鼠淋巴细胞增殖能力,提高小鼠的半数溶血值、抗体生成细胞数;增强小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的能力及提高NK细胞活性,结果与许多文献报道基本一致^[5-7]。蜂胶的组成成分是一个非常复杂的复合体,要明确某种成分起何种生物学作用,还需要作大量的实验研究工作。

参考文献：

[1]郭伽,周立东.蜂胶的化学成分研究进展[J].中国养蜂,2000,5l (2):17—18.

[2]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[z].2003.

[3]王玉芬.蜂胶的研究进展[J].河北医药,2002,24(3):227—229.

[4]Takagi Y,choi Is,Yamaahita T,et aJ.Immune activatation and ra-dioprotection by propolis[J].Am J chin Med,2005.33(2):231-240.

[5]邵艳.蜂胶调节小鼠免疫功能实验研究[J].浙江中西医结合杂志, 2005。15(2):90一92.

[6]谭宗艳。李彬,王彦武,等.蜂胶影响小鼠免疫功能的实验研究[J]. 中国热带医学,2006,6(4):589—590.

[7]胡怡秀.胡春生,胡余明.等.北京蜂胶对小鼠免疫功能影响的实验 研究[J].实用预防医学.2005,12(5):1049一1052.