不同浓度的河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药菌株的抑菌作用

【摘要】目的：探讨不同浓度的河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐(金葡菌)药株的抑菌效果。方法：采用琼脂平板扩散法,以金葡菌耐药株为实验菌种,设置不同的蜂胶浓度组及对照组,即将蜂胶溶液倍比稀释至0.0621%(1/512)及空白组(0% )共10个浓度处理组,每张滤纸片(直径6mm)滴加蜂胶溶液7μl,每组3次重复,记录不同浓度蜂胶对金葡菌耐药株24h抑菌效果。结果：河南蜂胶浓度从15.50 %倍比稀释至0.0621%及空白对照组,10个浓度处理组对金葡菌耐药株24h抑菌环直径 (mm)依次分别为13.83±0.58、11.00±0.50、10.33±0.63、9.00±0.00、7.83±0.76、7.00±0.50、6.22±0.03、6.12±0.03、0.00± 0.00、0.00±0.00。结论:随河南蜂胶浓度降低,抑菌环直径变小。提示河南蜂胶随浓度降低,对金葡菌耐药株的抑菌活力减弱,河南蜂胶对金葡菌耐药株产生抑菌环最小浓度为0.1242%,产生明显抑菌环的最小浓度为0.4968%。

【作者】 陈建  杨献军  许兵红  李进芬

【关键词】蜂胶 金黄色葡萄球菌 耐药株

金黄色葡萄球菌(金葡菌)是儿科感染最常见的致病菌^[1],金葡菌感染引起的葡萄球菌烫伤样皮肤综合征发生于6岁以下儿童,尤其好发于新生儿^[2],临床上发现,儿科感染金葡菌耐药数目不断增多,使得感染发生率不断增加,金葡菌的耐药性已成为临床上棘手的问题之一。本课题组首次就河南蜂胶对儿科金葡菌青霉素耐药株(金葡菌耐药株)的抗菌作用进行系列研究。报道如下。

材料与方法

一、蜂胶溶液配制

将产自河南新乡的蜂胶溶于95%乙醇,2周后过滤,得蜂胶乙醇溶液,浓度31%。蜂胶由本课题组配制提供。

二、试验菌种

儿科金葡菌青霉素耐药株 (staphylococcus aureus),由新乡医学院形态学实验室提供,使用前接种到pH6.5固体培养基上,37℃恒温培养16~18h备用。

三、抑菌活力测定

抑菌活力测定采用平板滤纸片法,滤纸片直径6.0mm,灭菌干燥后备用。固体培养基采用肉汤培养基,配比如下:牛肉500g(浸液)、蛋白胨10g、氯化钠5g、K₂HPO₄·12H₂O1g、琼脂20g,加双蒸水至1000ml,调pH至6.5,每个直径7.5cm培养皿加入12ml培养基,制成平板备用。细菌复苏培养后,取培养至对数期细菌配成 6×10⁸cells/ml菌液,涂于平板上,将滤纸片加7μl蜂胶溶液样品,37℃培养24h后测量记录抑菌环直径。

四、实验分组

设置不同浓度蜂胶实验组和空白对照组,蜂胶原液(31%)按1/2倍比稀释至1/512,95%乙醇(蜂胶浓度0.0%)作对照组,蜂胶原液1/2稀释组浓度15.5%,剂量1085μg;蜂胶原液1/4稀释组浓度7.75%,剂量542.5μg;蜂胶原液1/8稀释组浓度3.875% ,剂量271.25μg;蜂胶原液1/16稀释组浓度1.9875%,剂量135.62μg;蜂胶原液1/32稀释组浓度0.9937%,剂量67.81μg;蜂胶原液1/64稀释组浓度0.4968%,剂量33.90μg;蜂胶原液1/128稀释组浓度0.2484%,剂量16.95μg;蜂胶原液1/256稀释组浓度0.1242%,剂量8.47μg;蜂胶原液1/512稀释组浓度0.0621%,剂量4.23μg。每组3次重复,记录各组的抑菌效果。

结果

不同浓度的河南蜂胶对金葡菌耐药株的抑菌环直径 见表1。随蜂胶浓度降低,抑菌环直径变小,蜂胶原液稀释至1/64即0.4968%时,仍有明显抑菌环。蜂胶原液稀释至1/512即0.0621%,及空白对照组,观察不到明显的抑菌环。

讨论

目前,金葡菌已对众多抗生素产生耐药性,尤其出现多重耐药菌株,多重耐药金葡菌多从小儿脓胸和外科闭锁性病灶中分离获得^[3],现在耐药金葡菌引起的儿科感染已成为临床棘手问题。蜂胶 (propolis)是蜜蜂从植物芽苞或树干上采集树胶混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡后加工制成的树脂状固态物质,含有大量的生物活性物质和微量元素,具有广泛的药理作用。Kujumgiev等^[4]研究报道,不同产地的蜂胶虽然在化学组成上有所不同,温带地区所产蜂胶主要活性成分为黄酮类和芳香酸 ,而热带地区所产蜂胶不含此类物质,但抗菌作用基本相同,显示蜂胶抗菌活性为混合物整体效果。Hegazi等^[5]对产自奥地利、德国和法国三地蜂胶对比研究发现,三地蜂胶化学组成中各成分比例不同,抗菌活性也不尽相同。近几年,蜂胶文献日渐增多。如王晶等^[6]的蜂胶对变形链球菌抗菌作用;钟立人等^[7]的蜂胶对幽门螺杆菌的抗菌作用。本文课题组首次就河南蜂胶对儿科感染常见细菌的抗菌作用进行系统研究,发现河南蜂胶对一株儿科常见金葡菌青霉素耐药株具有明显的抗菌作用。结果表明,河南蜂胶随着浓度降低,抑菌环直径变小。据此推断,河南蜂胶随浓度降低,对金葡菌耐药株的抑菌活力减弱,河南蜂胶对金葡菌耐药株产生抑菌环最小浓度为0.1242%(实验剂量为8.47μg),产生明显抑菌环的最小浓度为0.4968% (实验剂量为33.90μg)。

参考文献:

[1]毛兰,何勇,许峰,等.金黄色葡萄球菌感染及耐药性探讨[J].实用儿科临床杂志ShiyongErkeLinchuangZazhi,2002,17(3):219-220.

[2]曾靖,董宗祈,陆小霞.葡萄球菌烫伤样皮肤综合征16例[J].实用儿科临床杂志ShiyongErkeLinchuangZazhi,2003,18(8):629-630.

[3]何述祥.金黄色葡萄球菌耐药性的变迁和耐药机制[J].内蒙古医学杂志,2001,33(3):342-345.

[4]KujumgievA ,TsvetkovaI,SerkedjievaV ,etal.Antibacterial,an tifungalandantiviralactivityofpropolisofdifferentgeographicorigin[J].JEthmopharmacol,1999,64(3):235-240.

[5]HegaziAG ,AbdeihadyFK ,AbdallahFA .ChemicalcompositionandantimicrobialactivityofEuropeanpropolis[J].ZNaturforsch,2000,55(1-2):70-75.

[6]王晶,李玉晶,张春梅,等.蜂胶抑制变形链球菌生长和黏附的体外研究[J].北京口腔医学,2002,10(2):79-81.

[7]钟立人,韩文辉,陈荷凤.蜂胶对幽门螺杆菌的抑制作用[J].天然产物研究与开发,2002,14(6):38-40.